Question

【題目】一種廣泛使用的除草劑（含氮有機物）在土壤中不易被降解，長期使用可污染土壤。為修復被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明）。

（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理。現有一升土壤浸出液，用無菌吸管吸取1 mL液樣至盛有9 mL無菌水的試管中，依次稀釋103稀釋度。各取0．1 mL已稀釋103倍的水樣分別涂布到三個培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數分別為55、56、57，則每升原土壤浸出液樣中菌體數為_____ 。

（2）要從長期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從用途方面來看，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點是_____ 。

（3）接種技術的核心是_____ 。培養(yǎng)時，只有很少菌落出現，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長的主要原因是_____ 或有氧條件抑制了這些細菌的生長。

（4）在培養(yǎng)基上形成的菌落中，無透明圈菌落利用的氮源主要是_____ ，有透明圈菌落利用的氮源主要是_____ ，據此可篩選出目的菌。實驗結果如圖顯示的A～E五種菌株中，_____ 是最理想菌株。

可將選取的所需菌種利用_____ 的方法長期保存。

Answer 1

【答案】5．6×108 在無氮固體培養(yǎng)基中添加了該除草劑 防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度 培養(yǎng)基中缺少這些細菌可利用的氮源 氮氣 該除草劑 E 甘油管藏

【解析】

1.選擇培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中加入某種化學物質，以抑制不需要的不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物生長，本題這種根據流程圖看，“無氮培養(yǎng)基+高濃度的除草劑”，說明A、B、C培養(yǎng)基中是以除草劑為唯一氮源。

2.每克樣品中的菌落數=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下的平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL）M代表稀釋的倍數。

（1）圖中稀釋的倍數是103，三個菌落的平均數=（55+56+57）÷3=56，則每毫升樣品中菌株數=56÷0.1×103=5.6×105個，所以每升土壤浸出液中的菌株數=5.6×105×103=5.6×108個。

（2）該除草劑為含氮有機物，為了選育能降解該除草劑的細菌，應采用唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，即無氮的固體培養(yǎng)基中添加該除草劑。

（3）接種技術的核心是無菌操作，防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度。培養(yǎng)時，只有很少菌落出現，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長，原因是培養(yǎng)基缺少這些細菌可利用的氮源或有氧條件抑制了這些細菌的生長。

（4）由于該除草劑的培養(yǎng)基不透明，被菌落分解后可產生透明帶，無透明帶說明除草劑未被分解，菌落利用的氮源就只能是空氣中的氮氣了；而出現透明帶說明除草劑被分解，菌落是分解該除草劑的細菌，氮源是該除草劑；E透明圈最大，故是最理想菌株。選取的所需菌種可利用甘油管藏的方法長期保存。