Question

【題目】如圖為某質(zhì)粒表達(dá)載體簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點(diǎn)，ampR為青霉素抗性基因，tctR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，ori為復(fù)制原點(diǎn)．又知植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)．若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性．已知耐旱基因兩端分別有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)．據(jù)圖回答：

（1）獲得耐旱基因常用基因文庫(kù)法．理論上，中含有該生物的全部基因；而中含有生物的部分基因．將含有耐旱基因的DNA與該質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRⅠ酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產(chǎn)物有種．
（2）將上述連接產(chǎn)物導(dǎo)入無(wú)任何抗藥性的宿主細(xì)胞后，將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能正常生長(zhǎng)的宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是 ．
（3）目的基因表達(dá)時(shí)，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是 ， 其合成的產(chǎn)物是 ．
（4）在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是 ．
（5）假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱植株與不耐旱植株的數(shù)量比為3：1時(shí)，則可推測(cè)該耐旱基因整合到了（填“同染色體的一條上”或“同染色體的兩條上”）．

Answer 1

【答案】
（1）基因組文庫(kù),cDNA文庫(kù),3
（2）載體﹣載體連接物（或質(zhì)粒﹣質(zhì)粒連接物）
（3）啟動(dòng)子,mRNA
（4）EcoRⅠ和BamHⅠ
（5）同染色體的一條上
【解析】解：（1）基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)，其中基因組文庫(kù)中含有該生物的全部基因，而cDNA文庫(kù)中含有生物的部分基因．將含有耐旱基因的DNA與該質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRⅠ酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產(chǎn)物有3種，即含有耐旱基因的DNA與含有耐旱基因的DNA連接、質(zhì)粒與質(zhì)粒連接、含有耐旱基因的DNA與質(zhì)粒連接．（2）由圖可知，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，四環(huán)素抗性基因會(huì)被破壞，因此將上述連接產(chǎn)物導(dǎo)入無(wú)任何抗藥性的宿主細(xì)胞后，將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能正常生長(zhǎng)的宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是載體﹣載體連接物（或質(zhì)粒﹣質(zhì)粒連接物）．（3）目的基因表達(dá)時(shí)，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是啟動(dòng)子，其合成的產(chǎn)物是mRNA．（4）酶切時(shí)應(yīng)選用限制酶EcoRⅠ和BamHⅠ，形成不同的黏性末端，這樣可以防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接．（5）若該耐旱基因整合到了同染色體的兩條上，則自交子代均耐旱；若該耐旱基因整合到了同染色體的一條上，則其子代中耐旱植株與不耐旱植株的數(shù)量比為3：1．

故答案為：（1）基因組文庫(kù) cDNA文庫(kù) 3（2）載體﹣載體連接物（或質(zhì)粒﹣質(zhì)粒連接物）（3）啟動(dòng)子 　mRNA（4）EcoRⅠ和BamHⅠ（5）同染色體的一條上

基因工程的操作步驟：

（1）提取目的基因：將需要的基因從供體生物的細(xì)胞內(nèi)提取出來(lái)。
（2）目的基因與運(yùn)載體結(jié)合：用與提取目的基因相同的限制酶切割質(zhì)粒使之出現(xiàn)一個(gè)切口，將目的基因插入切口處，讓目的基因的黏性末端與切口上的黏性末端互補(bǔ)配對(duì)后，在連接酶的作用下連接形成重組DNA分子。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞并使之?dāng)U增：要讓目的基因表達(dá)，必須將它導(dǎo)入受體細(xì)胞并進(jìn)行擴(kuò)增。為獲得目的基因的表達(dá)產(chǎn)物時(shí)，通常以大腸桿菌等無(wú)害易得的細(xì)菌為受體。
（4）目的基因的檢測(cè)和表達(dá)：目的基因?qū)�入受體細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其中的遺傳特性，只有通過(guò)檢測(cè)和鑒定得知。