Question

【題目】研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度的胰島素可以緩解肝細(xì)胞的損傷，且胰島素濃度越高保護(hù)作用越強(qiáng)。LPS是一種導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷的常見物質(zhì)（用生理鹽水配置）。現(xiàn)提供正常大鼠的肝臟完成實(shí)驗(yàn)步驟。（要求：胰島素濃度配置成低中高三個(gè)濃度，用細(xì)胞存活數(shù)作為指標(biāo)）

（1）實(shí)驗(yàn)步驟：

①肝細(xì)胞懸液的制備：取健康幼年鼠肝臟，適宜條件下剪碎再用________________ 消化，放入卡氏瓶中和________________中進(jìn)行，________________ 培養(yǎng)。 得到細(xì)胞懸液后分成________________ 組，編號(hào)A-E備用。

②胰島素溶液：用________________ 配制低中高三種不同濃度的胰島素溶液，分別加入對(duì)應(yīng)的C、D、E培養(yǎng)瓶中。

③A組作為空白對(duì)照，其余各組加入________________ 。

④各組存活細(xì)胞數(shù)的檢測。

（2）用柱形圖預(yù)測各組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果______________ 。

Answer 1

【答案】胰蛋白酶 CO2培養(yǎng)箱 原代 5 生理鹽水 等量的LPS 不同濃度的胰島素緩解肝細(xì)胞的損傷示意圖

【解析】

1. 胰蛋白酶能分解蛋白質(zhì)，胰蛋白酶作用時(shí)間過長，則細(xì)胞會(huì)被消化掉若時(shí)間太短，消化不充分。

2. 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)遵循對(duì)照原則，該實(shí)驗(yàn)需要一個(gè)空白對(duì)照，即添加生理鹽水的對(duì)照組。

（1）實(shí)驗(yàn)步驟：①肝細(xì)胞懸液的制備：取某健康幼年大鼠的肝臟，適宜條件下取出剪碎再用胰蛋白酶消化，經(jīng)多次洗滌離心處理得到分散的肝細(xì)胞；加入適宜的細(xì)胞培養(yǎng)液置于卡氏瓶和CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行原代培養(yǎng)；將培養(yǎng)得到的肝細(xì)胞懸液隨機(jī)分為5組，編號(hào)為A-E，每組均需再設(shè)置多個(gè)重復(fù)樣液，置于相同且適宜的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)備用。
②胰島素溶液：用生理鹽水配制低、中、高三種濃度的胰島素溶液，分別加入到C、D、E組的肝細(xì)胞懸液中。

③A組作為空白對(duì)照，其余各組加入等量的LPS。

④各組存活細(xì)胞數(shù)的檢測。

（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果預(yù)期：若本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果用細(xì)胞存活率作為檢測指標(biāo)，各組的存活細(xì)胞數(shù)先用比色計(jì)測出OD值，然后計(jì)算各組的細(xì)胞存活率=該組OD值/A組OD值*100%，不考慮細(xì)胞死亡對(duì)OD值的影響，由于LPS能導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，不同濃度的胰島素可以緩解肝細(xì)胞的損傷，等量LPS的情況下，胰島素濃度越大，細(xì)胞存活率越高，用柱形圖表示各組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
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