Question

【題目】λ噬菌體有極強(qiáng)的侵染能力，能在細(xì)菌中快速進(jìn)行DNA復(fù)制，產(chǎn)生子代噬菌體。在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中常用λ噬菌體構(gòu)建基因表達(dá)載體，使其在受體細(xì)菌中大量擴(kuò)增外源DNA，以備研究使用，相關(guān)操作如下圖所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）入噬菌體DNA上通常沒(méi)有合適的標(biāo)記基因，因此人工改造時(shí)需加裝合適的標(biāo)記基因，如上圖λgt10載體中的imm434基因。在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需用到的酶是___________，外源DNA的插入位置應(yīng)位于imm434基因____________（填“之中”或“之外”），原因是_______________________。

（2）上述過(guò)程中的λ噬菌體也可以用同位素標(biāo)記侵染細(xì)菌法來(lái)證明其遺傳物質(zhì)是DNA，推測(cè)體外包裝用的蛋白質(zhì)含有的化學(xué)元素至少有_________種。λ噬菌體與新型冠狀病毒的主要相同點(diǎn)（結(jié)構(gòu)上）與區(qū)別之處分別是______________________。

（3）利用體外包裝好的噬菌體進(jìn)行侵染培養(yǎng)時(shí)，常常選用大腸桿菌這類原核生物，原因有____________（答出2點(diǎn)）。侵染前應(yīng)對(duì)大腸桿菌進(jìn)行的處理是___________，即大腸桿菌轉(zhuǎn)化為感受態(tài)細(xì)胞。

Answer 1

【答案】限制酶和DNA連接酶 之外 保證標(biāo)記基因的完整性，便于標(biāo)記基因的表達(dá) 5 都無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)；λ噬菌體的遺傳物質(zhì)是DNA，新型冠狀病毒的遺傳物質(zhì)是RNA 原核生物繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少等 用Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)

【解析】

1．基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

2．基因工程的工具：

（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。

（1）題意顯示imm434基因是人工改造時(shí)加裝在λgt10載體上的標(biāo)記基因，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，通常需要用到的酶是限制酶和DNA連接酶，外源DNA的插入位置需要插入imm434基因之外，目的是保證保證標(biāo)記基因的完整性，便于標(biāo)記基因的表達(dá)。

（2）可以用同位素標(biāo)記侵染細(xì)菌法來(lái)證明其遺傳物質(zhì)是DNA的噬菌體中DNA的特有元素是磷元素，蛋白質(zhì)中的特有元素是S元素，基于上述分析，本題中的λ噬菌體也可以用于上述實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明其DNA和蛋白質(zhì)的特性也是各有特殊元素P和S，即體外包裝用的蛋白質(zhì)含有的化學(xué)元素至少有C、H、O、N、S共5種。λ噬菌體與新型冠狀病毒在結(jié)構(gòu)上的相同點(diǎn)表現(xiàn)為都是非細(xì)胞生物，二者的區(qū)別之處在于遺傳物質(zhì)不同，前者的遺傳物質(zhì)是DNA，后者的遺傳物質(zhì)是RNA。

（3）由于大腸桿菌為單細(xì)胞原核生物，且具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、繁殖快和遺傳物質(zhì)相對(duì)較少的特點(diǎn)，因此在利培養(yǎng)體外包裝好的噬菌體時(shí)，常常選用大腸桿菌這類生物。在侵染前，通常用Ca2+處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，即使其轉(zhuǎn)化為感受態(tài)細(xì)胞。