Question

【題目】S多肽是構(gòu)成乙肝病毒的主要成分，現(xiàn)利用基因工程制造乙肝疫苗．回答下列問(wèn)題：
（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增S基因前，需根據(jù)S基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)種引物，進(jìn)行PCR時(shí)需加熱至90～95℃然后冷卻至55～60℃，此操作的目的是 ．
（2）將S基因插入Ti質(zhì)粒中（如圖所示）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要在S基因前后兩端分別引入的酶切位點(diǎn)，目的是（答出一點(diǎn)即可）．
（3）用分子雜交技術(shù)檢測(cè)S基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA的具體操作過(guò)程是 ， 若 ， 則表明轉(zhuǎn)錄出了mRNA．
（4）乙肝疫苗的接種需要在一定時(shí)期內(nèi)間隔注射3次，其目的是使機(jī)體產(chǎn)生更多的 ．

Answer 1

【答案】
（1）2（兩）；使DNA解鏈，然后使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上
（2）Xba I和Sac I；防止目的基因（S基因）自身環(huán)化、防止目的基因（S基因）反向連接
（3）從受體細(xì)胞中提取mRNA，用標(biāo)記的S基因作探針，與mRNA雜交；顯示出雜交帶
（4）抗體和記憶（B）細(xì)胞
【解析】解：（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增S基因前，需根據(jù)S基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)2（兩）種引物；進(jìn)行PCR時(shí)需加熱至90～95℃然后冷卻至55～60℃，此操作的目的是使DNA解鏈，然后使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上．（2）農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T﹣DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上．根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T﹣DNA上，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上．圖中Ti質(zhì)粒的T﹣DNA上有限制酶Xba I和Sac I的識(shí)別位點(diǎn)，因此將S基因插入Ti質(zhì)粒中構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要在S基因前后兩端分別引入Xba I和Sac I 的酶切位點(diǎn)，用兩種限制酶切割還能防止目的基因（S基因）自身環(huán)化、防止目的基因（S基因）反向連接．（3）用分子雜交技術(shù)檢測(cè)S基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA的具體操作過(guò)程是從受體細(xì)胞中提取mRNA，用標(biāo)記的S基因作探針，與mRNA雜交，若顯示出雜交帶，則表明轉(zhuǎn)錄出了mRNA．（4）乙肝疫苗的接種需要在一定時(shí)期內(nèi)間隔注射3次，其目的是使機(jī)體產(chǎn)生更多的抗體和記憶（B）細(xì)胞．
【考點(diǎn)精析】解答此題的關(guān)鍵在于理解基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．