Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）回答與泡菜制作有關的問題：

(1)為了獲得用于泡菜腌制的優(yōu)良乳酸菌，通常將泡菜汁稀釋后涂布在MRS乳酸菌專用培養(yǎng)基上進行________分離，然后將其擴大培養(yǎng)，并進行特性鑒定。在進行特性鑒定時，必需進行耐酸實驗、耐高溫實驗和________實驗等，從而選出優(yōu)勢菌株。下圖是四個菌株在白菜汁培養(yǎng)基中的生長曲線，比較適合泡菜腌制的菌株是________。

(2)在泡菜腌制過程中，會產生有機酸、醇類、亞硝酸鹽等。腌制初期大量繁殖的微生物是________，醇類主要是由它進行________產生的，隨后泡菜中PH開始下降，其它微生物生長受到抑制。

(3)為測定腌制的泡菜中亞硝酸鹽含量，取腌制的泡菜和少量泡菜湯，在勻漿機中打成勻漿，過濾洗滌得到樣品溶液，先除去蛋白質、脂質等，然后與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應，再與________偶聯(lián)，形成紫紅色產物，然后用光程1cm的比色杯測定光密度值。如果制作標準曲線時的比色杯光程大于樣液的比色杯光程，測得的樣液中亞硝酸鹽含量________（偏大、偏小、無影響）。

（二）草甘膦是一種常用非選擇性除草劑，一種農桿菌中的基因E編碼抗草甘膦的酶，利用基因工程技術將基因E轉入大豆中，以提高大豆對草甘膦的忍耐能力，請回答：

(1)從農桿菌中提取含有基因E的DNA，用限制性核酸內切酶分別切割含基因E的DNA和農桿菌的________，然后用DNA連接酶連接，形成重組DNA分子并導入農桿菌。為了提高重組DNA形成的效率，除了考慮目的基因和載體的質量與濃度外，還需要考慮的主要因素有________。

(2)將________后的大豆胚尖浸泡在含有E基因的農桿菌溶液中，一段時間后取出并轉移到加有適當配比生長調節(jié)劑的培養(yǎng)基上，脫分化形成愈傷組織，為提高形成愈傷組織能力，可以對大豆胚尖進行適當的________刺激處理。

(3)除了用(2)中方法得到轉基因大豆外，也可以將上述愈傷組織進行液體懸浮培養(yǎng)，分散成________豐富、液泡小而細胞核大的單細胞，這種單細胞依次經細胞團、球形胚、心形胚和________，最后再生出完整的植株。

(4)為判斷本研究是否達到預期目的，可比較轉基因大豆和非轉基因大豆的________性狀。

Answer 1

【答案】單菌落 耐鹽 D 假絲酵母菌 厭氧呼吸 N-1-萘基乙二胺 偏小 Ti質粒 粘性末端的情況、DNA連接酶活性 消毒 創(chuàng)傷 細胞質 胚狀體 耐草甘膦

【解析】

（一）1、泡菜制作的原理是乳酸菌進行無氧呼吸產生乳酸，為了防止微生物污染，制作泡菜過程中應進行無菌操作；泡菜鹽水的濃度應該是清水與鹽的比例應為4：1，如果鹽濃度過高會抑制乳酸菌發(fā)酵，造成咸而不酸，鹽濃度過低不足以抑制微生物生長，造成雜菌污染；為了縮短制作時間可以加入陳泡菜水，以增加乳酸菌數量；微生物培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基至少包括碳源、氮源、水、無機鹽等。

2、測定亞硝酸鹽含量時亞硝酸鹽在鹽酸酸化的條件下與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應，與N﹣1﹣萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料，用比色法可以推測樣品中的亞硝酸鹽的含量。

（二）1、農桿菌轉化法的原理：農桿菌中的Ti質粒上的T﹣DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上。根據農桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T﹣DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上。

2、植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制的條件下，將離體的植物器官、組織、細胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導其產生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。

（一）（1）為了獲得用于泡菜腌制的優(yōu)良乳酸菌，通常將泡菜汁稀釋后涂布在MRS乳酸菌專用培養(yǎng)基上進行單菌落分離，然后將其擴大培養(yǎng)，并進行特性鑒定。在進行特性鑒定時，必需進行耐酸實驗、耐高溫實驗和耐鹽實驗等，從而選出優(yōu)勢菌株。由曲線可知D前期數量較多，后期下降較快，所以適合泡菜腌制。

（2）在泡菜腌制過程中，會產生有機酸、醇類、亞硝酸鹽等。腌制初期大量繁殖的微生物是假絲酵母菌，醇類主要是由它進行厭氧呼吸產生的，隨后泡菜中PH開始下降，其它微生物生長受到抑制。

（3）為測定腌制的泡菜中亞硝酸鹽含量，取腌制的泡菜和少量泡菜湯，在勻漿機中打成勻漿，過濾洗滌得到樣品溶液，先除去蛋白質、脂質等，然后與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應，再與N﹣1﹣萘基乙二胺偶聯(lián)，形成紫紅色產物，然后用光程1cm的比色杯測定光密度值。如果制作標準曲線時的比色杯光程大于樣液的比色杯光程，測得的樣液中亞硝酸鹽含量偏小。

（二）

（1）農桿菌中的Ti質粒上的T﹣DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上。根據農桿菌的這一特點，從農桿菌中提取含有基因E的DNA，用限制性核酸內切酶分別切割含基因E的DNA和農桿菌的Ti質粒，然后用DNA連接酶連接，形成重組DNA分子并導入農桿菌。為了提高重組DNA形成的效率，除了考慮目的基因和載體的質量與濃度外，還需要考慮的主要因素有黏性末端的情況、DNA連接酶活性。

（2）將消毒后的大豆胚尖浸泡在含有E基因的農桿菌溶液中，一段時間后取出并轉移到加有適當配比生長調節(jié)劑的培養(yǎng)基上，脫分化形成愈傷組織，為提高形成愈傷組織能力，可以對大豆胚尖進行適當的創(chuàng)傷刺激處理。

（3）除了用（2）中方法得到轉基因大豆外，也可以將上述愈傷組織進行液體懸浮培養(yǎng)，分散成單細胞，這種單細胞的細胞質豐富、液泡小而細胞核大；這種單細胞依次經細胞團、球形胚、心形胚和胚狀體，最后再生出完整的植株。

（4）該研究的目的是提高大豆對草甘膦的忍耐能力，因此為判斷本研究是否達到預期目的，可比較轉基因大豆和非轉基因大豆的耐草甘膦性狀。