Question

【題目】高濃度的銨鹽對海水養(yǎng)殖中的對蝦有一定的毒害作用，是制約其大規(guī)模養(yǎng)殖的環(huán)境因素之一，具有高降解能力的硝化細(xì)菌可有效凈化水體中銨鹽，降低對蝦的死亡率，科研人員擬從當(dāng)?shù)貙ξr養(yǎng)殖池塘中篩選出對銨鹽降解率高且穩(wěn)定的硝化細(xì)菌菌株，操作流程如下圖1，請回答下列問題：

（1）為了篩選出硝化細(xì)菌，在配制選擇培養(yǎng)基時，需要以______為唯一氮源。

（2）該硝化細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基試管中培養(yǎng)時，其生長特征符合圖2中①所示，由此推測，利用錐形瓶培養(yǎng)該硝化細(xì)菌時需要振蕩培養(yǎng)的目的是增加硝化細(xì)菌與______、______的充分接觸。

（3）純化菌種時，除圖1中所示的接種方法外，還可采用______法。兩種方法的原理相似，都是先對菌懸液進(jìn)行______，使聚集的菌種分散開，最后在平板上形成單個菌落。

（4）在利用平板計數(shù)時，需每隔一個“時間間隔”統(tǒng)計一次菌落數(shù)，最后選取穩(wěn)定時的菌落數(shù)作為記錄結(jié)果，這樣可以避免因培養(yǎng)時間不足造成______，導(dǎo)致統(tǒng)計結(jié)果偏小。為使獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，還應(yīng)對每種候選菌株設(shè)置______。

（5）將篩選出的等量的三種候選菌甲、乙、丙，分別接入銨鹽濃度為40mg·L-1的模擬養(yǎng)殖污水中，在適宜條件下培養(yǎng)48h，結(jié)果如圖3。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇候選菌______（填甲、乙或丙）作為菌種進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)。

Answer 1

【答案】銨鹽 營養(yǎng)物質(zhì) 溶解氧（順序可顛倒） 稀釋涂布平板法 稀釋 遺漏菌落的數(shù)目 （至少3個）平行組 乙

【解析】

硝化細(xì)菌是自養(yǎng)型生物，能利用化學(xué)能將CO2還原為有機(jī)物。單菌落分離法包含劃線分離法和涂布分離法，常用于分離獲得單菌落。劃線分離法是用接種環(huán)以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來。稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞。

（1）為了篩選出對銨鹽降解率高且穩(wěn)定的硝化細(xì)菌菌株，在配制選擇培養(yǎng)基時，需要以銨鹽為唯一氮源。

（2）該硝化細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基試管中培養(yǎng)時，其生長特征符合圖2中①所示，由此推測，利用錐形瓶培養(yǎng)該硝化細(xì)菌時需要振蕩培養(yǎng)的目的是增加硝化細(xì)菌與營養(yǎng)物質(zhì)、溶解氧的充分接觸，促進(jìn)硝化細(xì)菌的繁殖。

（3）圖1中所示的接種方法為劃線分離法，還可采用稀釋涂布平板法獲得單菌落，純化菌種。兩種方法的原理相似，都是先對菌懸液進(jìn)行稀釋，使聚集的菌種分散開，最后在平板上形成單個菌落。

（4）菌落生長需要時間，在利用平板計數(shù)時，需每隔一個“時間間隔”統(tǒng)計一次菌落數(shù)，最后選取穩(wěn)定時的菌落數(shù)作為記錄結(jié)果，這樣可以避免因培養(yǎng)時間不足造成遺漏菌落的數(shù)目，導(dǎo)致統(tǒng)計結(jié)果偏小。為使獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，還應(yīng)對每種候選菌株設(shè)置（至少3個）平行組。

（5）據(jù)圖分析，乙的銨鹽濃度最低，說明乙菌種對銨鹽的降解效果最好，應(yīng)選擇候選菌乙作為菌種進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)。