Question

【題目】蟲(chóng)草中的超氧化物歧化酶(SOD)具有抗衰老作用。研究人員培育了能合成SOD的轉(zhuǎn)基因酵母菌。回答下列問(wèn)題:

注:Hind Ⅲ和 ApaLⅠ是兩種限制酶,箭頭表示酶的切割位置。

(1)將圖中的重組 DNA 分子用 Hind Ⅲ和 ApaLⅠ完全酶切后,可得到_______ 種 DNA 片段。 圖示的表達(dá)載體存在氨芐青霉素抗性基因,不能導(dǎo)入用于食品生產(chǎn)的酵母菌中,據(jù)圖分析,可用限制酶_____切除該抗性基因的部分片段使其失效,再用 DNA 連接酶使表達(dá)載體重新連接起來(lái)。

(2)作為受體細(xì)胞的酵母菌缺失 URA3 基因,必須在含有尿嘧啶的培養(yǎng)基中才能存活,因此,圖示表達(dá)載體上的 URA3 基因可作為_____供鑒定和選擇；為了篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌,所使用的培養(yǎng)基_____(填“需要”或“不需要”)添加尿嘧啶。

(3)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程,稱為_____。利用_____技術(shù)確定受體細(xì)胞中 SOD 基因是否轉(zhuǎn)錄。

Answer 1

【答案】3 ApaLI 標(biāo)記基因 不需要 轉(zhuǎn)化 分子雜交

【解析】

圖示中的基因表達(dá)載體中有外源SOD基因（目的基因），Hind Ⅲ和 ApaLⅠ兩種限制酶，氨芐青霉素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，限制酶 ApaLⅠ會(huì)破壞標(biāo)記基因。

(1)由于重組質(zhì)粒上有1個(gè) Hind Ⅲ和2個(gè) ApaLⅠ的酶切位點(diǎn)，所以用Hind Ⅲ和 ApaLⅠ完全酶切后,可得到3種 DNA 片段。 根據(jù)圖示信息可知，若讓氨芐青霉素抗性基因失效,可用限制酶ApaLⅠ進(jìn)行切割。

(2)作為受體細(xì)胞的酵母菌缺失 URA3 基因,必須在含有尿嘧啶的培養(yǎng)基中才能存活,因此,圖示表達(dá)載體上的 URA3 基因可作為標(biāo)記基因，供鑒定和選擇；為了篩選出成功導(dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌,所使用的培養(yǎng)基不需要添加尿嘧啶。因?yàn)槌晒��?dǎo)入表達(dá)載體的酵母菌含有URA3 基因，可以在不含尿嘧啶的培養(yǎng)基中存活。

(3)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程,稱為轉(zhuǎn)化。檢測(cè)受體細(xì)胞中SOD基因是否轉(zhuǎn)錄，即檢測(cè)是否生成相應(yīng)的mRNA，可用標(biāo)記的SOD基因（目的基因）作為探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)。