Question

【題目】土壤是“微生物的天然培養(yǎng)基”，下面是有關(guān)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)過程，請(qǐng)根據(jù)下圖回答相關(guān)問題：

（1）為分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該用_______的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離，并加入____________指示劑進(jìn)行鑒別。

（2）若取土樣5g，應(yīng)加入______配制成稀釋10倍的土壤溶液。因土壤中細(xì)菌密度很大，需要不斷加以稀釋，配制成如上圖所示的不同濃度的土壤溶液，取樣稀釋前，一定要____________以減少誤差。將103～107倍的稀釋液分別吸取0.1mL加入到固體培養(yǎng)基上，用____________將菌液分散，每個(gè)濃度稀釋液至少接種_________個(gè)平板，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。

（3）將接種的培養(yǎng)皿_________在37℃的_________箱中培養(yǎng)24～48h，觀察并統(tǒng)計(jì)________，結(jié)果如下表所示。找出合適濃度，推測(cè)出每克土樣中細(xì)菌數(shù)為_________________。

稀釋倍數(shù)	103	104	105	106	107
菌落數(shù)（個(gè)）	>500	367	248	26	18

Answer 1

【答案】以尿素為唯一氮源 酚紅 45mL無菌水 搖勻（振蕩、混勻） 涂布器 3 倒置 恒溫培養(yǎng) 菌落數(shù) 2.48×108

【解析】

土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)：
1．分離菌株的思路
（1）自然界中目的菌株的篩選：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。
（2）實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度。pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。
培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物
2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）稀釋涂布平板法（間接）
①當(dāng)樣品的稀釋庋足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。
②通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來推測(cè)樣品中大約含有的活菌數(shù)。
（2）利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)
3．分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。
4．實(shí)驗(yàn)流程
土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長(zhǎng)的菌落→鑒定。

（1）尿素分解菌能分解尿素作為氮源，而其他微生物在只有尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基上會(huì)因?yàn)槿鄙俚�源而不能生長(zhǎng)，所以為分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離，并加入酚紅指示劑進(jìn)行鑒別，當(dāng)尿素被分解形成氨后，會(huì)使培養(yǎng)基的PH升高指示劑將變紅。

（2）若取土樣5g，應(yīng)加入45mL無菌水配制成稀釋10倍的土壤溶液。取樣稀釋前，一定要震蕩使菌體分布均勻，以減少誤差。將103～107倍的稀釋液分別吸取0.1mL加入到固體培養(yǎng)基上，用涂布器將菌液分散，每個(gè)濃度稀釋液至少接種3個(gè)平板，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。

（3）將接種的培養(yǎng)皿倒置在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h，觀察并統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)。由于計(jì)數(shù)時(shí)合適的稀釋倍數(shù)應(yīng)以平板上出現(xiàn)30-300個(gè)菌落的為宜，所以稀釋倍數(shù)應(yīng)為105，所以根據(jù)表格數(shù)據(jù)可推測(cè)出每克土樣中細(xì)菌數(shù)為248÷0.1×105=2.48×108個(gè)。