Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖l、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn),請(qǐng)分析下列敘述正確的是

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	G↓GATCC CCTAG↑G	A↓AGCTT TTCGA↑A	G↓AATTC CTTAA↑G	CCC↓GGG GGG↑CCC

A. 一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有0個(gè)和4個(gè)游離的磷酸基團(tuán)

B. 若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越高

C. 用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，可以使用SmaⅠ切割

D. 使用EcoRI限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA可防止質(zhì)粒和外源DNA發(fā)生自身環(huán)化

Answer 1

【答案】B

【解析】

識(shí)圖分析可知，質(zhì)粒為環(huán)狀DNA分子，其上有4種限制酶的切割位點(diǎn)，其中的SmaⅠ酶切位點(diǎn)位于質(zhì)粒的標(biāo)記基因序列中；目的基因中含有4種限制酶的切割位點(diǎn)，但是因此SmaⅠ酶切位點(diǎn)位于目的基因序列中，因此如果選擇SmaⅠ酶切質(zhì)粒和目的基因會(huì)將標(biāo)記基因和目的基因破壞，因此該限制酶不能選擇使用。構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，一般如果選擇兩種不同的限制酶進(jìn)行切割質(zhì)粒和目的基因會(huì)產(chǎn)生不同的末端，可以防止質(zhì)粒和外源DNA發(fā)生自身環(huán)化。

由于質(zhì)粒在切割前是一個(gè)環(huán)狀DNA分子，因此上面沒(méi)有游離的磷酸基團(tuán)；當(dāng)質(zhì)粒被切割后形成了兩個(gè)末端各有1個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，故共有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，A錯(cuò)誤；SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，表示G和C這一對(duì)堿基對(duì)所占的比例就超高，而G和C之間含有三個(gè)氫鍵，故其熱穩(wěn)定性超高，B正確；質(zhì)�？股�素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因，由圖可知，標(biāo)記基因和外源DNA目的基因中 均含有SmaI酶切位點(diǎn)，都可以被SmaI酶破環(huán)，故不能使用該酶剪切質(zhì)粒和含有目的基因的DNA，C錯(cuò)誤；構(gòu)建含目的基因的重組質(zhì)粒A時(shí)，使用EcoRI限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA會(huì)產(chǎn)生相同的黏性末端，不能防止質(zhì)粒和外源DNA發(fā)生自身環(huán)化，D錯(cuò)誤。