Question

【題目】欲研究細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)適當時間后，產(chǎn)生的細胞總數(shù)、集落數(shù)與原培養(yǎng)細胞濃度的關(guān)系（集落是指貼壁生長的細胞增殖6代以上形成的細胞群體，肉眼可見），請完善實驗思路，預(yù)測實驗結(jié)果并進行分析與討論。

村料與用具：未知濃度的X細胞懸液，動物細胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)瓶若干，C02培養(yǎng)箱，血細胞計數(shù)板，顯微鏡，移液器，胰蛋白酶，染色劑等。

（要求與說明:細胞和集落計數(shù)、染色等具體過程不作要求，所用試劑的劑量不作要求，營養(yǎng)均滿足要求，各種條件適宜）

（1）完善實驗思路：

①____________________；

②據(jù)思路①，用動物細胞培養(yǎng)液稀釋獲得1000個/5mL、800個/5mL、600個/5mL、400個/5mL、200個/5mL、100個/5mL6種濃度的X細胞懸液；

③分別取5mL上述配制的6種濃度的X細胞懸液加到培養(yǎng)瓶中，每種濃度設(shè)若干重復(fù)樣品，放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3周后，去除培養(yǎng)液并染色；

④____________________；

⑤____________________；

⑥____________________。

（2）預(yù)測實驗結(jié)果：

若已知200個/5mL至800個/5mL濃度間，產(chǎn)生的集落數(shù)與原培養(yǎng)細胞濃度呈線性關(guān)系，但低于200個/5mL或高于800個/5mL的濃度將會偏離，請建立一個坐標系并畫出集落數(shù)與原培養(yǎng)細胞濃度關(guān)系曲線。

（3）分析與討論：

①高于800個/5mL的濃度會偏離線性關(guān)系的原因是_________________。

②低于200個/5mL會偏離線性關(guān)系的原因是___________，欲解決這種情況，可預(yù)先在培養(yǎng)瓶中制備一層_________細胞，以支持生長來提高效率。

Answer 1

【答案】 ①用血細胞計數(shù)板和顯微鏡對X細胞懸液計數(shù)，確定其濃度 對每個培養(yǎng)瓶的集落進行計數(shù)，記錄數(shù)據(jù)（并取平均值） 各培養(yǎng)瓶（或另取培養(yǎng)瓶）用胰蛋白酶液處理（集落）并稀釋，再用血細胞計數(shù)板和顯微鏡計數(shù) 對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和處理 多個細胞共同形成集落/集落有重疊 濃度太低，有些細胞死亡/不能存活/不能貼壁，不能培養(yǎng)形成集落 滋養(yǎng)/飼養(yǎng)層/(胚胎）成纖維

【解析】試題分析：本題主要圍繞實驗考查動物細胞培養(yǎng)。要求學生熟知實驗過程的描述、自變量與無關(guān)變量的設(shè)置，以及因變量的測量。

（1）①本實驗欲研究細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)適當時間后，產(chǎn)生的細胞總數(shù)、集落數(shù)與原培養(yǎng)細胞濃度的關(guān)系，因此實驗前，須測量原培養(yǎng)液細胞濃度，測量的方式采用血細胞計數(shù)板和顯微鏡

④培養(yǎng)完后，需對每個培養(yǎng)瓶的集落進行計數(shù)，記錄數(shù)據(jù)（并取平均值）

⑤集落是指貼壁生長的細胞增殖6代以上形成的細胞群體，所以測量細胞數(shù)，還需要將各培養(yǎng)瓶（或另取培養(yǎng)瓶）用胰蛋白酶液處理（集落）并稀釋，再用血細胞計數(shù)板和顯微鏡計數(shù)

⑥最后對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和處理

（2）描述的是產(chǎn)生的集落數(shù)與原培養(yǎng)細胞濃度的關(guān)系，因此曲線圖橫坐標為濃度，縱坐標為集落數(shù)。圖中必須描述出低于200個/5mL或高于800個/5mL的濃度將會偏離正常曲線，因此曲線圖為

（3）①高于800個/5mL的濃度會偏離線性關(guān)系的原因是集落有重疊。

②低于200個/5mL會偏離線性關(guān)系的原因是濃度太低，有些細胞死亡，欲解決這種情況，可預(yù)先在培養(yǎng)瓶中制備一層滋養(yǎng)細胞，以支持生長來提高效率。