Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）回答與泡菜腌制和亞硝酸鹽測定有關(guān)的問題：

（1）制作泡菜時，為縮短發(fā)酵周期，腌制前可加入乳酸菌。為了獲得優(yōu)良的乳酸菌菌種，分離前將泡菜汁用_________稀釋后制成較稀濃度的懸液，這樣做的目的是在培養(yǎng)時有利于獲得_____。

（2）在MRS 乳酸菌專用培養(yǎng)基（含CaCO3）上會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈(如圖)，實驗結(jié)果見下表。

菌種	菌落直徑：C(mm)	透明圈直徑：H（mm）	H/C
I	5.1	11.2	2.2
II	8.1	13.0	1.6

有關(guān)本實驗的敘述，錯誤的是_____。

A. 應(yīng)選擇細菌I 進一步純化 B.篩選乳酸菌時，菌液應(yīng)稀釋后劃線

C.以上兩種細菌均能將乳酸分泌至細胞外 D.H/C 值反映了兩種細菌產(chǎn)生乳酸能力的差異

（3）泡菜腌制過程中會產(chǎn)生對人體有害的亞硝酸鹽，為測定泡菜中亞硝酸鹽含量，從泡菜中提取濾液，加入氫氧化鈉和硫酸鋅溶液產(chǎn)生白色沉淀，經(jīng)_____后過濾備用。

（4）亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與_________偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物。然后將樣品液用光程為 1cm 的比色杯，在 550nm 光波下測定光密度值。若所測得的光密度值過大應(yīng)采取的措施是_____或者_____。

（二）利用基因編輯技術(shù)將病毒外殼蛋白基因?qū)�入豬細胞中，然后通過核移植技術(shù)培育基因編輯豬， 可用于生產(chǎn)基因工程疫苗。下圖為基因編輯豬培育流程，請回答下列問題：

（1）對 1 號豬使用促性腺激素處理，使其超數(shù)排卵，用_____定位取卵。

（2）采集 2 號豬的組織塊，用胰蛋白酶處理獲得分散的成纖維細胞，放置于 37℃的 CO2 培養(yǎng)箱中進行_________培養(yǎng)，其中 CO2 的作用是_____。

（3）為提高重組卵發(fā)育的成功率，實驗過程中可采取的措施有： ①在核移植前對成纖維細胞進行_____培養(yǎng)處理； ②采用了_____技術(shù)刺激重組卵。

（4） 在 進 行 基 因 編 輯 操 作 時 ， 需 要 用 到 的 工 具 酶 有_____________。

（5）為檢測病毒外殼蛋白基因是否在 4 號豬體內(nèi)正常表達，可采用的方法是__________ 。

Answer 1

【答案】無菌水（或無菌蒸餾水） 單菌落 B 60℃水浴加熱（或水浴加熱、60℃水浴） N-1-萘基乙二胺 用蒸餾水稀釋樣品液 采用光程較小的比色杯 超聲監(jiān)視器（或B超） 液體懸�。ɑ驊腋�、振搖、振蕩） 維持培養(yǎng)液的pH 營養(yǎng)限制性培養(yǎng)（或調(diào)節(jié)血清濃度） 電脈沖（或電脈沖細胞融合或胚激活） 限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶 抗原-抗體雜交

【解析】

泡菜制作的原理：泡菜的制作離不開乳酸菌。在無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸，測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標準液進行目測對比，可以大致估算出亞硝酸鹽的含量。

核移植過程：

（一）（1）為了獲得優(yōu)良的乳酸菌菌種，分離前將泡菜汁用無菌水（或無菌蒸餾水）稀釋后制成較稀濃度的懸液，這樣做的目的是在培養(yǎng)時有利于獲得單菌落。

（2）A. 據(jù)圖分析，菌種Ⅰ分解淀粉的能力更強，應(yīng)選擇細菌I 進一步純化，A正確；

B. 圖示接種方法為稀釋涂布平板法，篩選分離淀粉分解菌時需要將菌液進行一定程度的稀釋才能涂布培養(yǎng)，B錯誤；

C. 據(jù)圖分析可知，兩個菌落均產(chǎn)生了透明圈，說明兩種細菌均能將淀粉酶分泌至細胞外，C正確；

D. 據(jù)表分析可知，H/C值越大，分解淀粉能力越強，該值的大小反映了兩種細菌分解淀粉能力的差異，D正確。

故選B。

（3）為測定泡菜中亞硝酸鹽含量，從泡菜中提取濾液，加入氫氧化鈉和硫酸鋅溶液產(chǎn)生白色沉淀，經(jīng)60℃水浴加熱后過濾備用。

（4）亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián)，形成紫紅色產(chǎn)物。然后將樣品液用光程為 1cm 的比色杯，在 550nm 光波下測定光密度值。若所測得的光密度值過大時，應(yīng)用蒸餾水稀釋樣品液或者采用光程較小的比色杯。

（二）（1）對供體母豬使用促性腺激素處理，使其超數(shù)排卵，用超聲監(jiān)視器定位取卵。

（2）采集2號豬的組織塊，用胰蛋白酶處理獲得分散的成纖維細胞，放置于 37℃的 CO2 培養(yǎng)箱中進行懸浮培養(yǎng)，其中 CO2 的作用是維持培養(yǎng)液的pH。

（3）為提高重組卵發(fā)育的成功率，在核移植前對成纖維細胞進行營養(yǎng)限制性培養(yǎng)處理或采用電脈沖技術(shù)刺激重組卵。

（4）在進行基因編輯操作時，需要用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。

（5）為檢測病毒外殼蛋白基因是否正常表達，可采用的方法是抗原-抗體雜交。