【題目】GDNF是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,對(duì)損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營(yíng)養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體(如圖1所示),并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中,用于干細(xì)胞基因治療的研究。

1)一個(gè)GDNF基因含有___個(gè)游離的磷酸基團(tuán),理論上而言,與GDNF基因含有相同堿基數(shù)的DNA分子共有_____種不同的排序。

2)限制酶的特點(diǎn)是___________________________,構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體時(shí),需選擇圖1中的______限制酶進(jìn)行酶切。

3)下列有關(guān)基因工程的運(yùn)載體中標(biāo)記基因的說法正確的是_______。

A.可檢測(cè)重組DNA分子是否導(dǎo)入了受體細(xì)胞

B.可指示受體細(xì)胞是否導(dǎo)入運(yùn)載體

C.可指示運(yùn)載體中是否插入了外源DNA片段

D.可檢測(cè)目的基因在受體細(xì)胞中是否成功表達(dá)

4)通常使用限制酶后會(huì)產(chǎn)生粘性末端,對(duì)下圖所示粘性末端的說法正確的是______。

A.甲、乙、丙粘性末端是由各自不同的限制性核酸內(nèi)切酶催化產(chǎn)生的

B.甲、乙具相同的粘性末端可形成重組DNA分子,但甲、丙之間不能

CDNA連接酶作用位點(diǎn)在b處,催化磷酸基團(tuán)和脫氧核糖之間形成化學(xué)鍵

D.切割甲的限制性核酸內(nèi)切酶不能識(shí)別由甲、乙片段形成的重組DNA分子

5)經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接,連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種:?jiǎn)蝹(gè)載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接(如圖1所示)。為鑒定這3種連接方式,選擇HpaI酶和BamHI酶對(duì)篩選的載體進(jìn)行雙酶切,并對(duì)酶切后的DNA片段進(jìn)行電泳分析,結(jié)果如圖2所示。圖中第_____泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。

【答案】2個(gè) 4700 特異性的識(shí)別并切割DNA Xho ABC ABD 2

【解析】

1、基因工程技術(shù)的基本步驟:

1)目的基因的獲取:方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成;

2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建:是基因工程的核心步驟,基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等;

3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞:根據(jù)受體細(xì)胞不同,導(dǎo)入的方法也不一樣.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法;將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法;

4)目的基因的檢測(cè)與鑒定:分子水平上的檢測(cè):①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù);②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù);③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù),個(gè)體水平上的鑒定:抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

1)該基因是鏈狀DNA分子,所以含有游離的磷酸基團(tuán)2個(gè),GDNF基因有700個(gè)堿基,所以可能的DNA分子由4700種。

2)限制酶是能夠特異性的識(shí)別DNA片段,并在特定的位點(diǎn)將DNA片段切割;由于質(zhì)粒上有XhoⅠ識(shí)別位點(diǎn),而且在啟動(dòng)子之后,所以選用XhoⅠ限制酶進(jìn)行酶切。

3ABC、運(yùn)載體中的標(biāo)記基因可檢測(cè)重組DNA分子是否導(dǎo)入了受體細(xì)胞或可指示哪些細(xì)胞是轉(zhuǎn)化細(xì)胞或可指示載體DNA分子中是否插入了外源DNA片段,ABC正確。

D、檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄采用分子雜交技術(shù),檢測(cè)目的基因是否翻譯采用抗原-抗體雜交法,D錯(cuò)誤。

故選ABC

4A、切割甲的限制酶的識(shí)別序列是-GAATTC-,切割乙的限制酶的識(shí)別序列是-CAATTG-,切割丙的限制酶的識(shí)別序列是-CTTAAG-,序列不同,所以是由不同的限制性核酸內(nèi)切酶催化產(chǎn)生的,A正確;

B、甲和乙的黏性末端相同,可以被DNA連接酶連接形成重組DNA分子,而甲和丙的黏性末端不同,因此不能連接形成重組DNA分子,B正確;

C、DNA連接酶連接的是DNA片段,所以該酶能催化磷酸基團(tuán)和脫氧核糖之間形成磷酸二酯鍵,作用位點(diǎn)在a處,C錯(cuò)誤;

D、甲、乙片段形成的重組DNA分子的序列是-CAATTC-,而甲酶的識(shí)別序列是-GAATTC-,且在GA之間切割,由此可見,甲酶不能識(shí)別由甲、乙片段形成的重組DNA分子,D正確。

故選ABD。

5)經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接,連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有三種:?jiǎn)蝹(gè)載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接(如圖1所示),為鑒定這3種連接方式,選擇HpaI酶和BamHI酶對(duì)篩選的載體進(jìn)行雙酶切,若屬于載體自連,且產(chǎn)生的酶切片段只有一種;若是正向連接的重組載體,其產(chǎn)生的酶切片段數(shù)為2個(gè),且長(zhǎng)度分別與質(zhì)粒和GDNF基因長(zhǎng)度相同;若是正向連接的重組載體,酶切后產(chǎn)生兩種長(zhǎng)度的片段,即700bp600bp,第二條帶。

練習(xí)冊(cè)系列答案
相關(guān)習(xí)題

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【題目】當(dāng)人吃了過咸的食物時(shí),有關(guān)機(jī)體水分調(diào)節(jié)的順序正確的是

①大腦皮層興奮產(chǎn)生渴覺 ②下丘腦滲透壓感受器興奮 ③攝水量增加

④垂體釋放抗利尿激素增加 ⑤減少尿的排出

A.①→②→③→④→⑤B.②→④→④→③→⑤

C.D.

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【題目】下圖甲表示四種不同的物質(zhì)在一個(gè)動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)外的相對(duì)濃度差異。據(jù)圖分析一定是通過圖乙所示的過程來維持細(xì)胞內(nèi)外濃度的物質(zhì)是( )

A. Na

B. K

C. 胰島素

D. CO2

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【題目】某研究小組研究了生長(zhǎng)素類似物甲和生長(zhǎng)素類似物乙對(duì)微型月季插條生根的影響,其結(jié)果如圖所示。在圖示濃度范圍內(nèi),下列敘述正確的是(

A.浸泡法比沾蘸法處理插條基部的時(shí)間短

B.插條不用生長(zhǎng)素類似物處理也能生根

C.生長(zhǎng)素類似物甲對(duì)插條生根的作用具有兩重性

D.生長(zhǎng)素類似物乙對(duì)插條生根的促進(jìn)作用較弱

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【題目】某興趣小組為探討植物向光性的原因,重復(fù)設(shè)計(jì)了1880年達(dá)爾文的部分實(shí)驗(yàn),即在單側(cè)光條件下,對(duì)萌發(fā)的燕麥胚芽鞘進(jìn)行不同的處理,得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖。請(qǐng)分析回答:

1)該小組進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)時(shí)需進(jìn)行變量控制,其中光照、溫度屬于___________變量,對(duì)這些變量的要求是________________。

2)在燕麥胚芽鞘的向光性實(shí)驗(yàn)中,通過實(shí)驗(yàn)②③④對(duì)比,可得到的結(jié)論是________________

3)該小組所做的實(shí)驗(yàn)?zāi)懿荒苷f明生長(zhǎng)素的產(chǎn)生部位是尖端?_____________。若能,請(qǐng)說明理由;若不能,請(qǐng)完善實(shí)驗(yàn)。_____________________________

4)燕麥胚芽鞘尖端產(chǎn)生的生長(zhǎng)素進(jìn)行極性運(yùn)輸作用于尖端以下部分。為探究重力是否是燕麥胚芽鞘尖端生長(zhǎng)素進(jìn)行極性運(yùn)輸?shù)那疤釛l件,請(qǐng)選用圖的實(shí)驗(yàn)材料,用圖表示實(shí)驗(yàn)方案,并簡(jiǎn)要寫出實(shí)驗(yàn)預(yù)期及結(jié)論。____________

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【題目】I.培養(yǎng)基的配制與培養(yǎng)是微生物實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。

1)圖1所示的是制備固體培養(yǎng)基時(shí)的實(shí)驗(yàn)操作步 驟之一,一般稱為______________。配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在熔化后分裝前必須進(jìn)行________________,培養(yǎng)基在接種前要進(jìn)行_______________滅菌,滅菌是否徹底或是否被污染需要檢測(cè),方法是_______________________。

II.從自然菌樣中篩選理想菌種的步驟是:采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離。

2)不同微生物的生存環(huán)境不同,獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣,然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從__________環(huán)境采集。

3)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長(zhǎng)的特定環(huán)境條件,使其群落中的數(shù)量大大增加,從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對(duì)產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇_________________的培養(yǎng)基,并在_________條件下培養(yǎng)。

4)圖2和圖3是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解,獲得圖2效果的接種方法是______________,獲得圖3效果的接種方法是______________。

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【題目】圖甲表示受到刺激時(shí)神經(jīng)纖維上的電位變化,圖乙表示突觸,有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(  )

A.軸突膜處于②狀態(tài)時(shí)鈉離子內(nèi)流B.軸突膜處于④和⑤狀態(tài)時(shí)鈉離子外流

C.a處能完成電信號(hào)化學(xué)信號(hào)的轉(zhuǎn)變D.a興奮一定會(huì)使b產(chǎn)生圖甲所示的變化

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【題目】某人血型的鑒定結(jié)果如圖,此人血型為(  )

A.AB.BC.OD.AB

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【題目】1示某液體處理紫色洋蔥表皮細(xì)胞的顯微放大圖,請(qǐng)據(jù)圖回答問題.

1)細(xì)胞正在發(fā)生__________

2C為細(xì)胞壁,主要成分是_____。

3)請(qǐng)?jiān)趫D中標(biāo)注了A、B的細(xì)胞中劃出組成原生質(zhì)層的范圍.在一個(gè)成熟的植物細(xì)胞中,可以把它看作是一層_____膜。

4)下列能夠表示洋蔥表皮細(xì)胞在質(zhì)壁分離及其復(fù)原過程中B/A值變化的圖形(注:橫坐標(biāo)代表時(shí)間,縱坐標(biāo)代表B/A的值)是_____。

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