Question

【題目】Mse Ⅰ、Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ三種限制酶的識別序列及切割位點分別是GAAT↓TAATTC、C↓TGCAG、G↓AATTC,如圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切點.

若要用如圖質粒和外源DNA構建重組質粒,需要對質粒進行改造，構建新的限制酶切位點。在構建新的限制酶切位點的過程中需要使用的酶是()

A. 限制酶PstⅠ、DNA聚合酶、DNA連接酶

B. 限制酶EcoRⅠ、DNA聚合酶、DNA連接酶

C. 限制酶EcoRⅠ、限制酶PstⅠ、DNA聚合酶

D. 限制酶PstⅠ、限制酶EcoRⅠ、DNA連接酶

Answer 1

【答案】B

【解析】分析圖2可知，含目的基因的外源DNA中含有限制酶PstⅠ、MseⅠ、EcoRⅠ的切割位點，其中EcoRⅠ酶的切割位點位于目的基因中。因此構建基因表達載體時。不能用EcoRⅠ酶切割，應該用限制酶PstⅠ、MseⅠ進行切割；為了保證切割的質粒與目的基因露出的粘性末端相同，在對質粒進行改造時，應該將限制酶EcoRⅠ的切割位點改造成限制酶MseⅠ的切割位點；因此，首先需要用限制酶EcoRⅠ切割，其次需要用DNA聚合酶將相應的脫氧核苷酸序列連接上去，最后再用DNA連接酶連接形成限制酶MseⅠ的切割位點，所以B選項正確。