Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題

（一）回答與果酒和果醋制作有關(guān)的問題：

（1）欲純化野生酵母，最簡單的分離方法是__________；醋化醋桿菌的培養(yǎng)基由蛋白胨、酵母提取物和_________組成。

（2）培養(yǎng)基滅菌常采用高壓蒸汽滅菌法，影響其滅菌效果的因素有溫度、壓力、時(shí)間以及__________等；滅菌結(jié)束后，待高壓鍋或滅菌鍋__________時(shí)打開鍋蓋。

（3）用鋁箔將甲、乙、丙瓶上口蓋住的原因是__________。

（4）將醋化醋桿菌培養(yǎng)物和適量的酒—水混合物混勻后，調(diào)pH至7．0，再與_________的鋸末等吸附物混勻，進(jìn)行發(fā)酵。乙瓶中________（有/無）二氧化碳產(chǎn)生。

（5）若用果汁釀造果酒，可添加_________使果膠徹底分解成半乳糖醛酸。

（二）豬繁殖與呼吸綜合癥是一種嚴(yán)重威脅我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的傳染病，由PRRSV病毒引起�？茖W(xué)家制備出PRRSV-GP3蛋白的單克隆抗體可對該病進(jìn)行診斷和治療，制備過程如圖所示。請回答下列問題：

（1）在GP3蛋白的單克隆抗體制備過程中，需要用純化的GP3蛋白對小鼠進(jìn)行多次免疫，若檢測到小鼠血清中出現(xiàn)________，說明小鼠已經(jīng)產(chǎn)生了相應(yīng)的體液免疫過程，可以從小鼠_________內(nèi)提取細(xì)胞甲。

（2）①過程為________，常用于介導(dǎo)的化學(xué)試劑為________。

（3）第二次篩選前，需先對細(xì)胞丙進(jìn)行________培養(yǎng)，再通過________（填方法）篩選出細(xì)胞丁。

（4）單抗比一般抗血清優(yōu)越得多，原因是________________。

Answer 1

【答案】劃線分離法 甘露醇 滅菌材料和數(shù)量、鍋內(nèi)空氣含量 壓力與大氣壓相同時(shí)； 防治雜菌污染和揮發(fā)性物質(zhì)揮發(fā) 滅菌 無 果膠酶和果膠甲酯酶 GP3抗體 脾臟 細(xì)胞融合 聚乙二醇 克隆 抗體檢驗(yàn) 一般抗血清中的抗體是一群識別不同抗原部位的抗體混合物，而單抗識別抗原部位具有專一性

【解析】

（一）本實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容是制作果酒和果醋，所用的原料是葡萄或其他果汁。葡萄酒是酵母利用葡萄糖進(jìn)行酒精發(fā)酵（乙醇發(fā)酵）的產(chǎn)物。酵母菌只有在無氧條件下才能進(jìn)行酒精發(fā)酵，即將葡萄糖氧化成乙醇。若獲得醋化醋桿菌的菌種，可先在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)繁殖，液體培養(yǎng)基的配方如下：蛋白胨、酵母提取物、甘露醇等；培養(yǎng)基需要高壓滅菌法進(jìn)行滅菌，并且滅菌后需要將各瓶口進(jìn)行密封處理。

（二）主要是單克隆抗體制作過程，單克隆抗體是細(xì)胞工程中動(dòng)物細(xì)胞融合的重要應(yīng)用，與傳統(tǒng)血清抗體相比，單克隆抗體的純度高，特異性強(qiáng)，能夠準(zhǔn)確與PRRSV病毒進(jìn)行診斷和治療。其基本步驟：對小鼠進(jìn)行免疫→提取B淋巴細(xì)胞→將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合→通過篩選、克隆化培養(yǎng)和擴(kuò)大化培養(yǎng)、最終注入小鼠體內(nèi)→從腹腔腹水中提取單克隆抗體。

（一）

（1）純化分離野生型酵母菌，最常用最簡單的方法就是劃線分離法，得到較為純化的酵母菌；根據(jù)配方培養(yǎng)醋化醋桿菌所用的液體培養(yǎng)基中含有酵母菌提取物、蛋白胨、甘露醇等。

（2）高壓滅菌法的影響因素有：溫度、壓力、時(shí)間、滅菌產(chǎn)品的數(shù)量、鍋內(nèi)空氣含量等因素，并且由于滅菌過程中鍋內(nèi)壓力較大，為了防止壓力過大造成的破壞，當(dāng)滅菌結(jié)束后，等到鍋內(nèi)壓力減小到外界大氣壓時(shí)，再打開鍋蓋。

（3）圖中甲、乙、丙三瓶密封的主要作用：防止雜菌感染，另外同時(shí)也可以防止物質(zhì)揮發(fā)。

（4）圖中所示的過程為利用果酒產(chǎn)生果醋的過程，乙瓶為發(fā)酵瓶，酒—水混合物與滅菌后的鋸末混合，便于醋化醋桿菌吸附和發(fā)酵，反應(yīng)過程：C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O，過程中沒有CO2生成。

（5）若除去反應(yīng)產(chǎn)品中的果膠，可以利用果膠酶和果膠甲酯酶可水解細(xì)胞壁中的果膠，將其分解為半乳糖醛酸。

（二）

（1）反復(fù)對小鼠進(jìn)行同種抗原的接種過程，小鼠發(fā)生體液免疫并產(chǎn)生相應(yīng)的GP3抗體，因此可以從免疫器官脾臟中獲取能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，即甲細(xì)胞。

（2）①過程將細(xì)胞甲和小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，通過聚乙二醇（PEG）完成誘導(dǎo)融合。

（3）融合后的雜交瘤細(xì)胞經(jīng)過兩次篩選，分別選出雜交瘤細(xì)胞和經(jīng)過克隆培養(yǎng)后存活的能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞。

（4）單克隆抗體的優(yōu)勢是特異性強(qiáng)，靈敏度高，同時(shí)可以大量制備，而一般的血清抗體純度低，多種抗體同時(shí)存在，與相應(yīng)蛋白質(zhì)結(jié)合的特異性較小。