Question

【題目】復合型免疫缺乏癥患者由于缺少腺苷酸脫氨酶基因（ada基因）而導致免疫功能 缺損�？茖W家將正常人的ada基因轉人患者的T細胞中，再將攜帶ada基因的T細胞 注入患者體內，可以改善患者的免疫功能�；卮鹣铝袉栴}：

（1）從正常人的T細胞中獲取總RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，在cDNA 中還需要篩選才能獲得ada基因，其原因是___________。

（2）根據(jù)ada基因兩端的核苷酸序列合成___________，并通過___________技術對目的基因進行篩選和擴增。在擴增過程中首先要進行90-95℃保溫，其目的是___________。

（3）上述治療方法屬于___________（填“體內基因治療”或“體外基因治療”），將人正常的ada基因導人到患者的T細胞時，需要構建基因表達載體，其目的是___________。

Answer 1

【答案】逆轉錄 T細胞中有多種基因進行表達 引物 PCR 使DNA解旋 體外基因治療 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用

【解析】

1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA—分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質—抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
2、基因治療的種類：體外基因治療和體內基因治療（注意兩者的區(qū)別），其中效果比較可靠的是體外基因治療。
（1）體外基因治療：先從病人體內獲得某種細胞進行培養(yǎng)，然后再體外完成轉移，再篩選成功轉移的細胞增植培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內，如腺苷酸脫氨酶基因的轉移。
（2）體內基因治療：用基因工程的方法直接向人體組織細胞中轉移基因的方法。

（1）以RNA為模板合成DNA的過程為逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化；T細胞中有多種基因進行表達，如ada基因，因此T細胞中的總RNA逆轉錄形成的cDNA中含有ada。
（2）根據(jù)ada基因兩端的核苷酸序列合成引物，并通過PCR技術對目的基因進行篩選和擴增。在擴增過程中首先要進行90～95℃保溫，其目的是使DNA解旋。
（3）先從病人體內獲得某種細胞進行培養(yǎng)，然后再體外完成轉移，再篩選成功轉移的細胞增植培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內，這屬于體外基因治療。構建基因表達載體的目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。