Question

【題目】下圖為利用人成纖維細(xì)胞(具分裂能力、能在 HAT 培養(yǎng)基上存活)和小鼠骨髓瘤細(xì)胞(具分裂能力、不能在 HAT 培養(yǎng)基上存活)進(jìn)行人類基因定位的操作示意圖，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：

（1）圖示方法是動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的應(yīng)用，該技術(shù)的基礎(chǔ)是________技術(shù)。

（2）操作所用的成纖維細(xì)胞應(yīng)傳代____代以內(nèi)，誘導(dǎo)融合時(shí)需要加入的化學(xué)促融劑是____。

（3）人、鼠細(xì)胞先經(jīng)過(guò)細(xì)胞融合形成多核細(xì)胞，再經(jīng)過(guò)一次____分裂，形成單核細(xì)胞。

（4）HAT培養(yǎng)基起________培養(yǎng)作用，培養(yǎng)時(shí)溫度應(yīng)為________℃ ，操作中加入烏本苷的目的是____________。

Answer 1

【答案】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 10 PEG 有絲 選擇 36．5±0．5 除去成纖維細(xì)胞（或選出雜交瘤細(xì)胞）

【解析】

1、分析圖示：該技術(shù)屬于動(dòng)物細(xì)胞融合。2、動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等，其中動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物工程技術(shù)的基礎(chǔ)。原代培養(yǎng)細(xì)胞傳至10代左右就不容易傳下去，細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡。3、動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞；誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有電激、聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒等。

（1）據(jù)圖分析，該技術(shù)屬于動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)；該技術(shù)的基礎(chǔ)是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。
（2）成纖維細(xì)胞應(yīng)傳代10代以內(nèi)；遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生改變的細(xì)胞株，誘導(dǎo)融合時(shí)需要加入的促融劑是PEG（化學(xué)誘導(dǎo)）。
（3）人、鼠細(xì)胞先經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜融合形成多核細(xì)胞，經(jīng)過(guò)一次有絲分裂，形成單核細(xì)胞。
（4）據(jù)題干信息，人成纖維細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基上存活，而小鼠骨髓瘤細(xì)胞不能在HAT培養(yǎng)基上存活，則HAT培養(yǎng)基起選擇培養(yǎng)作用；培養(yǎng)時(shí)溫度應(yīng)為36.5±0.5℃（與人的體溫相接近）；篩選出人成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞融合的雜交細(xì)胞，操作中加入烏本苷的目的是除去成纖維細(xì)胞，篩選出雜交細(xì)胞。