Question

【題目】某種熒光蛋白（GFP）在紫外光或藍(lán)光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細(xì)胞中目的基因的表達(dá)。某科研團(tuán)隊(duì)將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5′末端，獲得了L1-GFP融合基因（簡稱為甲）作目的基因，并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核表達(dá)載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如下，圖中E1~E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同�；卮鹣铝袉栴}：

（1）據(jù)圖推斷，該團(tuán)隊(duì)在將甲插入質(zhì)粒P0時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是_________。使用這兩種酶進(jìn)行酶切是為了保證_______________的完整性，啟動子能與_______特異性結(jié)合驅(qū)動轉(zhuǎn)錄開始。

（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細(xì)胞后，若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了________和_________過程。

（3）為了獲得含有甲的牛，該團(tuán)隊(duì)需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細(xì)胞的_____________移入牛的____________中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。

（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細(xì)胞中，某同學(xué)用PCR方法進(jìn)行鑒定。在鑒定時應(yīng)分別以該牛不同組織細(xì)胞中的_________（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。

Answer 1

【答案】E1和E4 甲 RNA聚合酶 轉(zhuǎn)錄 翻譯 細(xì)胞核 去核卵母細(xì)胞 核DNA

【解析】

目的基因的獲取方法：基因文庫獲取，PCR，人工合成。

基因工程常用的工具：限制酶、DNA連接酶、運(yùn)載體。

（1）甲是L1-GFP融合基因，需要插入到質(zhì)粒中啟動子和終止子之間且不能破壞自身的完整性，由圖可知，應(yīng)該選擇E1和E4進(jìn)行切割，啟動子是RNA聚合酶結(jié)合的位點(diǎn)，啟動轉(zhuǎn)錄。

（2）熒光蛋白基因表達(dá)才會出現(xiàn)綠色熒光，故若在該細(xì)胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細(xì)胞中完成了基因表達(dá)過程，即完成了轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。

（3）要獲得含熒光的牛，應(yīng)該通過核移植技術(shù)把能夠產(chǎn)生綠色熒光的細(xì)胞核移入去核的卵母細(xì)胞中，獲得重組細(xì)胞，再經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)及胚胎移植，即可獲得含有甲的牛。

（4）由于基因的選擇性表達(dá)，同一基因在不同細(xì)胞的表達(dá)情況不同，要檢測不同細(xì)胞中是否含目的基因，不能選擇RNA進(jìn)行鑒定，而應(yīng)該獲取DNA進(jìn)行檢測，另外PCR的模板是DNA不是RNA。