Question

【題目】目前所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖所示。

（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因，以便于 。

（2）pBR322分子中有單個(gè)EcoR I限制酶作用位點(diǎn)，EcoR 1只能識(shí)別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoR I的切點(diǎn)，請(qǐng)畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端 。

（3）pBR322分子中另有單個(gè)的BamHI限制酶作用位點(diǎn)，現(xiàn)將經(jīng)BamHI處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BgIⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復(fù) 鍵，即獲得了重組質(zhì)粒。

（4）為了檢測(cè)上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無ampR和tetR的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果（空圈表示與圖二對(duì)照無菌落的位置）。與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是 ，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是 。

Answer 1

【答案】（1）篩選（鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞）

（2）

（3）磷酸二酯 （4）能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素 pBR322質(zhì)粒

【解析】：（1）質(zhì)粒上的抗性基因可作標(biāo)記基因，便于鑒定受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入目的基因．

（2）在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRⅠ的切點(diǎn)，即目的基因兩側(cè)有-GAATTC-，目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端為．

（3）DNA連接酶能連接磷酸二酯鍵．

（4）圖二中的菌落能抗氨芐青霉素，將滅菌絨布按到圖二中培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到圖三含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，仍能生長的也能抗四環(huán)素，空圈為不能抗四環(huán)素的（只能抗氨芐青霉素）．圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌既能抗氨芐青霉素，又能抗四環(huán)素，說明導(dǎo)入的是pBR322質(zhì)粒，而不是重組質(zhì)粒（重組質(zhì)粒的四環(huán)素抗性基因被切斷，不能表達(dá)，因此含重組質(zhì)粒的大腸桿菌抗氨芐青霉素）．