Question

【題目】絞股藍(lán)葉片細(xì)胞中含有抗TMV(煙草花葉病毒)基因，對TMV具有抗感染能力，煙草是雙子葉植物，由于TMV的感染會(huì)導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)，研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV的煙草，主要流程如圖所示：

（1）圖中①過程表示______________，通過這種方法構(gòu)建的文庫屬于______________文庫。

（2）在過程③構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，必須在目的基因的兩側(cè)添加______________和______________，應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是______________基因。

（3）④過程常用的方法是______________。

（4）通過⑤獲得再生植株的理論基礎(chǔ)是______________，過程⑥可采取______________的方法，檢測植株是否合成了抗TMV蛋白。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄 cDNA（ 部分基因） 啟動(dòng)子 終止子 抗卡那霉素 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 植物細(xì)胞的全能性 抗原一抗體雜交

【解析】

圖中①表示以絞股藍(lán)葉片細(xì)胞中的RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA文庫的過程，②表示從cDNA文庫中獲取目的基因，③代表基因表達(dá)載體的構(gòu)建，④表示把基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，⑤目的基因的檢測與鑒定。

（1）根據(jù)分析可知，圖中①過程表示逆轉(zhuǎn)錄，通過這種方法構(gòu)建的文庫屬于cDNA（部分基因）文庫。

（2）在基因表達(dá)載體中，目的基因的兩側(cè)應(yīng)含有啟動(dòng)子和終止子，以保證目的基因正常轉(zhuǎn)錄。根據(jù)⑤過程中培養(yǎng)基中含有卡那霉素，可判斷基因表達(dá)載體中抗卡那霉素基因?yàn)闃?biāo)記基因。

（3）將基因表達(dá)載體導(dǎo)入雙子葉植物，常選用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。

（4）植物細(xì)胞具有全能性，因此可通過⑤獲得再生植株，檢測植株是否合成了抗TMV蛋白，可采取抗原一抗體雜交的方法。

類型	步驟	檢測內(nèi)容	方法	結(jié)果顯示
分 子 檢 測	導(dǎo)入 檢測	目的基因是否插入受體細(xì)胞染色體的DNA上	DNA分子雜交技術(shù)(DNA和DNA之間)	是否成功顯示出雜交帶
	表 達(dá) 檢 測	目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA	核酸分子雜交技術(shù)( DNA和mRNA之間)	同上
		目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)	蛋白質(zhì)分子雜交(抗原和抗體之間)	同上
個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定		①確定是否具有抗性及抗性程度 ②基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性是否相同	①抗蟲或抗病的接種實(shí)驗(yàn) ②基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品活性的比較	是否賦予了預(yù)期抗性或蛋白質(zhì)活性