Question

【題目】乙型肝炎病毒（HBV）可引發(fā)慢性肝炎、肝硬化等疾病，乙型肝炎病毒調節(jié)蛋白HBx對HBV復制有重要作用。圖1表示在PCR過程中HBx基因與引物的關系，圖2表示利用中國倉鼠生產(chǎn)乙肝病毒HBx蛋白流程圖。回答下列問題：

（1）利用PCR技術擴增圖1中HBx基因時，在第______次循環(huán)結束后即可出現(xiàn)兩條鏈等長的目的基因片段。圖2中②過程需要用到限制酶和DNA連接酶，兩種酶作用的化學鍵______（填“相同”或“不相同”）。

（2）基因表達載體導入受精卵常用______法，檢測HBx基因是否轉錄出mRNA時，需要用______做探針，再與相應的物質雜交。

（3）④過程體外受精前需要對精子進行______處理，卵母細胞需要發(fā)育到______期，才具備與精子受精的能力。⑤過程將獲得的早期胚胎移植到經(jīng)過______處理的受體倉鼠子宮內(nèi)。

（4）在⑤步聚操作前對胚胎進行了檢查和篩選，發(fā)現(xiàn)有些胚胎因為外源基因的插入而死亡外源基因插入導致胚胎死亡的原因可能是______。

Answer 1

【答案】3 相同 顯微注射 放射性同位素標記的含目的基因的DNA片段 獲能 MⅡ中 同期發(fā)情 外源基因的插入導致胚胎正常發(fā)育所需的基因不能表達

【解析】

基因工程的操作步驟：目的基因的獲取、構建基因表達載體、把目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測和鑒定。

圖2中：①獲取目的基因、②構建基因表達載體、④體外受精、⑤胚胎移植。

（1）利用PCR技術擴增的過程為，由此可知，圖1中HBx基因時，在第3次循環(huán)結束后即可出現(xiàn)兩條鏈等長的目的基因片段。圖2中②過程需要用到限制酶和DNA連接酶，兩種酶作用的化學鍵相同，都是磷酸二酯鍵。

（2）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；檢測HBx基因是否轉錄出mRNA時，應該采用分子雜交技術，需要用放射性同位素標記的含目的基因的DNA片段做探針，再與RNA進行雜交，看是否出現(xiàn)雜交帶。

（3）④為體外受精，該過程前需要對精子進行獲能處理，卵母細胞需要發(fā)育到MⅡ中期，才具備與精子受精的能力。⑤過程將獲得的早期胚胎移植到經(jīng)過同期發(fā)情處理的受體倉鼠子宮內(nèi)，以保證胚胎移植入相同的生理環(huán)境。

（4）胚胎移植前對胚胎進行了檢查和篩選，發(fā)現(xiàn)有些胚胎因為外源基因的插入而死亡，可能原因是：外源基因的插入導致胚胎發(fā)育所需的正�；�因不能表達。