Question

【題目】Ⅰ土壤有“微生物的天然培養(yǎng)基”之稱，下圖表示對(duì)土壤中某種微生物進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)而進(jìn)行的對(duì)樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養(yǎng)流程示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問(wèn)題。

（1）圖示統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)目的方法叫做_______________法，主要包括__________操作和____________操作。

（2）當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的_____________，一般選擇菌落數(shù)在_______________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

（3）圖中選擇了104、105、106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，最可能是測(cè)定土壤中_____________（填“細(xì)菌”或“放線菌”或“真菌”）的數(shù)量，這個(gè)平板需要在30～37℃溫度下、PH調(diào)至______培養(yǎng)1-2d。Ⅱ.以下是胡蘿卜素的粗提取和鑒定實(shí)驗(yàn)

（1）請(qǐng)完成用萃取法提取胡蘿卜素的實(shí)驗(yàn)流程：胡蘿卜→粉碎→干燥→萃取→過(guò)濾→_______→胡蘿卜素。

（2）胡蘿卜素的紙層析標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果示意圖，圖中A、B、C、D四點(diǎn)中，屬于標(biāo)準(zhǔn)樣品的樣點(diǎn)是_______________，圖中②表示________________。

Answer 1

【答案】稀釋涂布平板 系列（梯度）稀釋 涂布平板 一個(gè)活菌 30～300 細(xì)菌 中性或微堿性 濃縮 A、D 其它色素或雜質(zhì)

【解析】

1、活菌計(jì)數(shù)最常用的是稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法，最關(guān)鍵的步驟是梯度稀釋和涂布平板，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30~300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。由于在土壤中不同微生物的數(shù)量的不同，因此培養(yǎng)不同的微生物進(jìn)對(duì)土壤樣液的稀釋倍數(shù)也不同，測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量，一般選擇104、105和106的倍稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，測(cè)定放線菌的數(shù)量，一般選擇103、104和105的倍稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，測(cè)定真菌的數(shù)量，一般選擇102、103和104的倍稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。

2、胡蘿卜素是橘黃色結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有機(jī)溶劑。

3、提取天然胡蘿卜素的方法主要有：一是從植物中提��；二是從大面積養(yǎng)殖的巖藻中荻得；三是利用微生物的發(fā)酵生產(chǎn)。

4、最適宜作胡蘿卜素萃取劑的是石油醚。

5、實(shí)驗(yàn)流程為：胡蘿卜→粉碎→干燥→萃取（石油醚）→過(guò)濾_→濃縮→胡蘿卜素→鑒定（紙層析法）。

6、對(duì)提取的胡蘿卜素粗品鑒定采用的是紙層析法，其原理是色素在濾紙上擴(kuò)散速度不同，從而使各成分分開(kāi)。因?qū)游鲆阂讚]發(fā)，故應(yīng)在上方用玻璃蓋蓋嚴(yán)，以防止層析液揮發(fā)。在進(jìn)行點(diǎn)樣時(shí)，應(yīng)注意點(diǎn)樣應(yīng)該快速細(xì)致并保持濾紙干燥。層析液不能沒(méi)及濾液基線，否則點(diǎn)樣處的有機(jī)成分會(huì)溶解在層析液中。

Ⅰ.（1）圖示統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)目的方法叫做稀釋涂布平板法，主要包括系列（梯度）稀釋操作和涂布平板操作。

（2）當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，一般選擇菌落數(shù)在30～300 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

（3）圖中選擇了104、105、106倍的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，最可能是測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，這個(gè)平板需要在30～37℃溫度下、pH調(diào)至中性或微堿性培養(yǎng)1-2d。

Ⅱ. （1）用萃取法提取胡蘿卜素的實(shí)驗(yàn)流程：胡蘿卜→粉碎→干燥→萃取→過(guò)濾→濃縮→胡蘿卜素。

（2）胡蘿卜素的紙層析標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果示意圖，圖中A、B、C、D四點(diǎn)中，屬于標(biāo)準(zhǔn)樣品的樣點(diǎn)是A、D ，圖中②表示其它色素或雜質(zhì)。