Question

【題目】如圖為綠色熒光小鼠制備流程圖，Gfp是綠色熒光蛋白基因，請分析回答：

（1）構建表達載體需要的酶是：____________，表達載體包含綠色熒光蛋白基因Gfp、________、__________、終止子和復制原點等。

（2）圖中載體上的Neo基因是一種抗生素抗性基因，圖中步驟③所用的G418是一種抗生素（對細胞有毒害作用），添加G418的目的是_______________。

（3）圖中所用的胚胎干細胞來自_______________。

（4）圖中步驟⑤要將細胞注射入圖中囊胚的________位置，圖中步驟⑥胚胎移植前要對代孕母鼠用激素處理，目的是________。

（5）可以使用________方法在蛋白質水平上鑒定小鼠是否存在綠色熒光蛋白。

Answer 1

【答案】（8分，每空1分）

（1）限制性核酸內切酶、DNA連接酶 標記基因 啟動子

（2）篩選出導入目的基因的胚胎干細胞

（3）早期胚胎或原始性腺

（4）內細胞團 同期發(fā)情處理

（5）抗原—抗體雜交

【解析】（1）構建表達載體時，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和運載體，還需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組質粒；表達載體包含目的基因（綠色熒光蛋白基因Gfp）、標記基因、啟動子、終止子和復制原點等。

（2）步驟③所用的G418是一種抗生素，其作用是篩選出導入目的基因的胚胎干細胞。

（3）胚胎干細胞來自于早期胚胎或原始性腺。

（4）囊胚包括滋養(yǎng)層細胞和內細胞團細胞，其中滋養(yǎng)層細胞將發(fā)育成胎盤和胎膜，而內細胞團細胞將發(fā)育成各種組織，因此圖中步驟⑤要將細胞注射入圖中囊胚的內細胞團位置；圖中步驟⑥胚胎移植前要對代孕母鼠用激素處理，目的是同期發(fā)情處理。

（5）從分子水平上檢測小鼠是否存在綠色熒光蛋白，可采用抗原-抗體雜交法。