Question

8．(江蘇省黃橋中學(xué)2012屆高三月考)組建理想的載體需要對天然的質(zhì)粒進(jìn)行改造�？茖W(xué)家在體外構(gòu)建的大腸桿菌的一種質(zhì)粒只有某限制酶的一個識別序列，位于該質(zhì)粒的lacZ基因中。lacZ基因若無外源基因插入，便可表達(dá)出半乳糖苷酶。當(dāng)培養(yǎng)基中含有兩種物質(zhì)I和X時，X便會被半乳糖苷酶水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成藍(lán)色菌落。如果lacZ基因中插入了外源基因，帶有該種質(zhì)粒的大腸桿菌便不能表達(dá)半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中的X不會被水解成藍(lán)色，大腸桿菌將形成白色菌落。體外構(gòu)建的這種大腸桿菌質(zhì)粒還攜帶了氨芐青霉素抗性基因。下圖是利用lacZ基因的插入失活、篩選出重組質(zhì)粒的示意圖。據(jù)圖回答下列問題：

        

(1)作為受體大腸桿菌應(yīng)______________(填“含有”或“不含”)氨芐青霉素抗性基因，以方便篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。取用氯化鈣溶液處理過的受體大腸桿菌，置于試管Ⅱ中，完成基因工程操作的______________________________步驟。

(2)圖中的選擇培養(yǎng)基中除含有大腸桿菌必需的葡萄糖、氮源、無機(jī)鹽、水、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)加入__________________________________等物質(zhì)，用以篩選導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的受體大腸桿菌。

(3)將上述處理后的大腸桿菌置于圖中選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，以檢測受體大腸桿菌是否導(dǎo)入重組質(zhì)粒，請預(yù)測菌落的顏色，并分析結(jié)果：

①_______________________________________________。

②_______________________________________________。

(4)若改用噬菌體為運(yùn)載體，科學(xué)家分別用³²P、³⁵S標(biāo)記噬菌體內(nèi)的目的基因、外殼，在下圖中標(biāo)記元素³²P、³⁵S所在部位依次是________________(填圖中標(biāo)號)。

Answer 1

答案：(1)不含　目的基因?qū)�入受體細(xì)胞

(2)I、X、氨芐青霉素

(3)①如果長出藍(lán)色菌落，說明沒有與目的基因重組的質(zhì)粒已轉(zhuǎn)入受體菌(或說明重組質(zhì)粒沒導(dǎo)入受體大腸桿菌)

②如果長出白色菌落，說明重組質(zhì)粒已導(dǎo)入受體大腸桿菌

(4)①、④

解析：(1)標(biāo)記基因是氨芐青霉素基因，受體細(xì)胞不應(yīng)有該標(biāo)記基因。該步驟是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞。(2)該選擇培養(yǎng)基中除營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)該有氨芐青霉素起選擇作用和I、X起指示作用。(3)若導(dǎo)入了重組質(zhì)粒，LacZ基因被破壞，不能表達(dá)，X不會水解成藍(lán)色；若未導(dǎo)入，X會水解形成藍(lán)色菌落。(4)³²P存在于脫氧核苷酸的磷酸基中，³⁵S存在于蛋白質(zhì)的R基中。(5)效應(yīng)T細(xì)胞與靶細(xì)胞密切接觸，使靶細(xì)胞裂解死亡。