Question

【題目】如圖1表示某質(zhì)粒，該質(zhì)粒含有抗氨芐青霉素抗性基因（amp＇）和LacZ基因，LacZ基因能合成β-半乳糖苷酶，該酶能將白色底物X-Gal轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，圖2表示含目的基因的DNA片段，實(shí)驗(yàn)小組利用該質(zhì)粒為載體將目的基因?qū)�入大腸桿菌，并篩選成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞（ScaⅠ、ApaⅠ、EcoRⅠ表示限制酶切割位點(diǎn)）。請回答下列問題：

（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是_________。在構(gòu)建基因表達(dá)載體時應(yīng)選用的限制酶是__________。

（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌時，應(yīng)用__________處理大腸桿菌，制備感受態(tài)細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)室選用微生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是_________。

（3）重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌后，應(yīng)將大腸桿菌置于以X-Gal為底物，并添加_______________的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，挑選出__________（填“白色”或“藍(lán)色”）菌落。

（4）檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細(xì)胞常用的方法是__________，該方法依據(jù)的原理是__________。

Answer 1

【答案】（1）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定的復(fù)制并表達(dá) ApaⅠ和EcoRⅠ

（2）CaCl2繁殖速度快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少

（3）氨芐青霉素 白色

（4）DNA分子雜交技術(shù) 堿基互補(bǔ)配對

【解析】（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。由分析可知，ScaⅠ會破壞抗氨芐青霉素抗性基因，所以不能用限制酶ScaⅠ，而且要保證目的基因和質(zhì)粒定向連接，所以不能形成相同的黏性末端，故另一種酶選EcoRI酶，故選ApaⅠ和EcoRⅠ。

（2）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞，常用CaCl2處理，使之成為感受態(tài)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)室選用微生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是繁殖速度快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少。

（3）含有目的基因的質(zhì)粒能產(chǎn)生抗氨芐青霉素，因此可以在培養(yǎng)基中加氨芐青霉素篩選，由于該重組質(zhì)粒的LacZ基因被破壞，不能合成β-半乳糖苷酶，不能將白色底物X-Gal轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，因此挑選出白色菌落。

（4）檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)，依據(jù)的原理是堿基互補(bǔ)配對。