Question

【題目】下圖是綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，請據(jù)圖同答：

（1）(科學(xué)家獲取綠色熒光蛋白基因所選用的限制酶是________，最終獲得的綠色熒光蛋白基因的末端類型屬于___________。

（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒的目的是__________________________。為此，在重組質(zhì)粒中，除了綠色熒光蛋白基因和復(fù)制原點(diǎn)外，還應(yīng)有___________。

（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞，常用的方法是________。

（4）圖中的豬卵母細(xì)胞一般處在________期，常通過________（物理方法）對重組細(xì)胞進(jìn)行激活，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育進(jìn)程。

Answer 1

【答案】PstⅠ和EcoRⅠ 黏性末端使綠色熒光蛋白基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時能夠表達(dá)和發(fā)揮作用啟動子、終止子和標(biāo)記基因顯微注射法MⅡ中（減數(shù)第二次分裂中）電脈沖（或電刺激）

【解析】

分析題圖，圖示為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，其中①表示從水母中獲取目的基因（綠色熒光蛋白基因）的過程；②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；③表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過程；④表示提取體細(xì)胞核的過程；⑤表示去掉卵母細(xì)胞的細(xì)胞核的過程，⑥表示核移植過程；⑦表示早期胚胎培養(yǎng)過程；⑧表示胚胎移植過程。

（1）據(jù)圖分析，若使用SmaⅠ限制酶，會破壞目的基因，因此獲取綠色熒光蛋白基因所運(yùn)用的限制酶應(yīng)是圖中所示的PstⅠ和EcoRⅠ。根據(jù)獲得的綠色熒光蛋白基因的末端特點(diǎn)可知其屬于黏性末端。

（2）基因工程中，構(gòu)建重組質(zhì)粒的目的是使綠色熒光蛋白基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時能夠表達(dá)和發(fā)揮作用；重組質(zhì)粒的組成成分包括目的基因（綠色熒光蛋白基因）、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)、啟動子和終止子。

（3）將目的基因?qū)�入豬胎兒成纖維細(xì)胞（動物細(xì)胞）常用顯微注射法。

（4）作為受體細(xì)胞的去核卵母細(xì)胞一般處在減數(shù)第二次分裂中期，常通過電脈沖刺激進(jìn)行激活，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育進(jìn)程。