Question

【題目】(一）為從養(yǎng)豬場(chǎng)周圍土壤中分離產(chǎn)脲酶的微生物，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。

（1）培養(yǎng)基的制備：本實(shí)驗(yàn)需在LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上進(jìn)行接種，因尿素_____________，只能用_____________過(guò)濾。下列對(duì)本實(shí)驗(yàn)選用的尿素固體培養(yǎng)基和LB固體培養(yǎng)基的敘述，錯(cuò)誤的是（____）

A.都要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B.都含有N源C.都要添加瓊脂糖D.都要添加酚紅指示劑

（2）制備細(xì)菌懸液：在無(wú)菌條件下，將土樣加到含有適量____________的三角瓶中，振蕩搖勻，并以此方法制備不同濃度的土壤稀釋液。

（3）接種：本實(shí)驗(yàn)采用的接種方法是____________。

(二）某研究小組利用下圖所示的現(xiàn)代生物科學(xué)技術(shù)生產(chǎn)藥用蛋白一一人組織纖溶酶原激活物（htPA)。請(qǐng)回答：

（1）構(gòu)建重組表達(dá)載體時(shí)，通常用_____________切割htPA基因與載體，形成________，再通過(guò)DNA連接酶連接。

（2）為獲取更多的實(shí)驗(yàn)用受精卵，要對(duì)供卵母羊注射相應(yīng)激素，使其________________，獲得較多的卵母細(xì)胞。采集的精子需要經(jīng)過(guò)________________處理，才具備受精能力。

（3）若想獲得更多轉(zhuǎn)htPA基因母羊，還可以對(duì)含有htPA基因的胚胎進(jìn)行________________。 然后再通過(guò)________________技術(shù)可獲得較多后代。

（4）下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（____）

A.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)

B.大腸桿菌質(zhì)粒是基因工程最常用的載體

C.若目的基因的序列是未知的，可選用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

D.DNA連接酶催化形成氫鍵和磷酸二酯鍵的形成

Answer 1

【答案】 加熱會(huì)分解 G6玻璃砂漏斗 D 無(wú)菌水 涂布法（或涂布分離法） 相同限制性核酸內(nèi)切 相同的粘性末端 超數(shù)排卵 獲能 胚胎分割 胚胎移植 B

【解析】試題分析：從土壤中分離目的微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株�；�因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

(一）（1）尿素加熱會(huì)分解，所以實(shí)驗(yàn)過(guò)程中只能用G6玻璃砂漏斗進(jìn)行過(guò)濾。尿素固體培養(yǎng)基和LB固體培養(yǎng)基都含有N元素，一般都用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌，且都需要進(jìn)入瓊脂以使得培養(yǎng)基成為固態(tài)；后者需要加入酚紅指示劑，但是前者不需要。

（2）為了防止雜菌污染，在無(wú)菌條件下，將土樣加到含有適量無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩搖勻，并以此方法制備不同濃度的土壤稀釋液。

（3）據(jù)圖可知，該實(shí)驗(yàn)的接種方法為稀釋涂布平板法。

(二）（1）在基因工程中，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，把目的基因與運(yùn)載體一般用同種限制酶進(jìn)行切割，再用DNA連接酶連接，以構(gòu)建基因表達(dá)載體。

（2）超數(shù)排卵處理時(shí)，需要注射促性腺激素；采集的精子必須經(jīng)過(guò)獲能處理后才具備受精能力。

（3）早期胚胎細(xì)胞具有全能性，可利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)獲得多個(gè)轉(zhuǎn)基因個(gè)體。

（4）載體上的抗性基因是可用于篩選含重組DNA的細(xì)胞，但不能促進(jìn)目的基因的表達(dá)，A錯(cuò)誤；大腸桿菌質(zhì)粒是基因工程最常用的載體，B正確；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提，是要有“一段已經(jīng)目的基因的核苷酸序列”，C錯(cuò)誤；DNA連接酶催化形成磷酸二酯鍵的形成，D錯(cuò)誤。