Question

【題目】為獲取可降解高鹽度工業(yè)廢水中有機物的耐鹽菌，研究人員進行了如下實驗： ①制備含3%NaCl的固體培養(yǎng)基，以及含3%、5%和7%NaCl以高鹽度工業(yè)廢水中有機物為碳源的液體培養(yǎng)基；
②將高鹽度廢水采用平板劃線法接種于含3%Nacl的固體培養(yǎng)基，如圖一．然后置于適宜條件下培養(yǎng)一段時間，觀察形成的菌落特征；
③將分離純化后的菌株接種到試管固體斜面培養(yǎng)基上，適宜條件下培養(yǎng)適當時間，將該試管短期保藏待用；
④取固體斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分別加入到步驟①中制備的3組液體培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)35小時，定時取樣統(tǒng)計活菌數目．測定結果如圖二所示．

回答下列問題：
（1）配制培養(yǎng)基時，滅菌、添加NaCl溶液和調節(jié)pH的先后順序是 ．
（2）步驟②平板劃線操作過程中，第一次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是防止雜菌污染，第二次及之后的幾次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是 ． 完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環(huán)次．
（3）步驟④中統(tǒng)計活菌數目用法，該方法統(tǒng)計的活菌數（填“大于”、“等于”或“小于”）實際數值．直接從靜置的培養(yǎng)液中取樣計數的做法是錯誤的，正確的操作是 ． 若每種濃度設3個重復實驗，每次統(tǒng)計活菌數目時需要從個培養(yǎng)瓶中取樣．
（4）由圖二可知，該耐鹽菌最適合處理含 （濃度）NaCl的廢水．

Answer 1

【答案】
（1）添加NaCI溶液、調節(jié)pH、滅菌
（2）殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端）；6
（3）稀釋涂布平板；小于；將培養(yǎng)液搖勻后取樣計數；9
（4）3%
【解析】】解：（1）配制培養(yǎng)基時，需待各種營養(yǎng)成分配制完成后再調節(jié)pH，最后進行滅菌．（2）平板劃線操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；劃線操作結束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者．由于圖1中有5次劃線，每次劃線完需灼燒，再加上第一步灼燒，故完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環(huán)6次．（3）據實驗操作可知，步驟④中常采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數目．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數目時，由于培養(yǎng)過程中兩個或多個細胞可能生長在一起形成一個菌落，導致統(tǒng)計的菌落數往往比活菌的實際數目低．取樣時不能直接從靜置的培養(yǎng)液中取樣計數，需將培養(yǎng)液搖勻后取樣計數．由于每種濃度設3個重復實驗，共有3種不同濃度，故每次統(tǒng)計活菌數目時，需要從9個培養(yǎng)瓶中取樣．（4）由圖二可知，該耐鹽菌 在3% NaCl最多，故最適合處理含 3% NaCl的廢水．

所以答案是：（1）添加NaCI溶液、調節(jié)pH、滅菌（2）殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端） 6（3）稀釋涂布平板法 將培養(yǎng)液搖勻后取樣計數 9（4）3% 適當延長處理時間（增大接種量）