Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖l、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切位點。請回答下列問題：

（1）一個圖1所示的質粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前、后，分別含有 、 個游離的磷酸基團。

（2）若對圖中質粒進行改造，插入的SmaⅠ酶切位點越多，質粒的熱穩(wěn)定性越 。

（3）用圖中的質粒和外源DNA構建重組質粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是 。

（4）與只使用EcoR I相比較，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ兩種限制酶同時處理質粒、外源DNA的優(yōu)點在于可以防止 。

（5）為了獲取重組質粒，將切割后的質粒與目的基因片段混合，并加入 酶，若兩兩相連，則連接產(chǎn)物中有哪幾種情況? 。

（6）重組質粒中抗生素抗性基因的作用是為了 。

（7）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉運蛋白基因，將重組質粒導入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達的初步檢測。

Answer 1

【答案】

（1）0、2

（2）高

（3）SmaⅠ破壞質粒上的抗性基因和外源DNA中的目的基因

（4）質粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化

（5）DNA連接 目的基因自身相連的、運載體自身相連的和目的基因與運載體相連（3分）

（6）（鑒別和）篩選含有目的基因的受體細胞

（7）蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質

【解析】

試題分析：

（1）雙鏈DNA中兩條脫氧核苷酸鏈中各有一個游離的磷酸基，而質粒呈環(huán)狀，沒有游離磷酸基；質粒上有一個Sma Ⅰ切點，經(jīng)該酶處理后的質粒呈鏈狀，出現(xiàn)兩個游離磷酸基。

（2）根據(jù)SmaⅠ識別的核苷酸序列中都為C-G堿基對，由于每個C-G堿基對之間能形成3個氫鍵，每個A-T堿基對之間能形成2個氫鍵，因此，DNA分子中C-G堿基對比例越高，DNA分子越穩(wěn)定。

（3）用SmaⅠ酶切割外源DNA和質粒時，會導致目的基因與抗性基因被破壞，因此不能用SmaⅠ構建重組質粒。

（4）BamHⅠ和HinRⅢ兩種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端不同，若用這兩種限制酶同時處理外源DNA和質粒，再用DNA連接酶連接兩者時，可避免切割的外源DNA、質粒的粘性末端自身環(huán)化。

（5）構建重組質粒時，用DNA連接酶將目的基因與運載體連接起來，同時也可能將目的基因或運載體自我連接，所以連接的產(chǎn)物有目的基因自身相連的、運載體自身相連的和目的基因與運載體相連共三種情況。

（6）重組質粒中抗生素抗性基因是標記基因，用于（鑒別和）篩選含有目的基因的受體細胞。

（7）大腸桿菌喪失吸收蔗糖能力，導入蔗糖轉運蛋白基因后可恢復吸收蔗糖能力，所以在以蔗糖為唯一含碳營養(yǎng)物質的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可篩選出需要的表達成功的大腸桿菌。