Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員從陸地棉中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因：

（1）在________________酶處理后可得到___________端（填圖中字母）相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入如圖所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建______________并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。融合基因在農(nóng)桿菌中無法表達(dá)所需產(chǎn)物的原因可能是__________。

（3）為實(shí)現(xiàn)有效表達(dá)，科研人員用農(nóng)桿菌提取液浸染油菜細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。在___________條件下，將轉(zhuǎn)基因細(xì)胞接種在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)_________和_________形成轉(zhuǎn)基因油菜。此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加_______________。

Answer 1

【答案】ClaⅠ（限制酶）和DNA連接 A、D 表達(dá)載體（或“重組質(zhì)�！保� 融合基因選自真核生物，有內(nèi)含子，在農(nóng)桿菌中，其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列不能被切除 無菌條件 脫分化 再分化 植物激素

【解析】

在已知序列的情況下，可用化學(xué)方法人工合成獲取酶D基因（或PCR擴(kuò)增）。由題圖中酶D基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因都有ClaI酶切位點(diǎn)，可用ClaI酶切割酶D基因的A端和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因的D端，再用DNA連接酶將其連成融合基因 。

（1）用ClaI酶切割酶D基因的A端和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因的D端，再用DNA連接酶將其連接為A、D端相連的融合基因。

（2）將融合基因插入Ti質(zhì)�？尚纬芍亟M質(zhì)粒或者重組DNA；融合基因在農(nóng)桿菌中無法表達(dá)所需產(chǎn)物的原因可能是：融合基因選自真核生物，有內(nèi)含子，在農(nóng)桿菌中，其初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中與內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的RNA序列不能被切除。

（3）為實(shí)現(xiàn)有效表達(dá)，科研人員用農(nóng)桿菌提取液浸染油菜細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。在無菌條件下，將轉(zhuǎn)基因細(xì)胞接種在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)脫分化和再分化形成轉(zhuǎn)基因油菜。此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加植物激素。