Question

【題目】有機磷農(nóng)藥樂果在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用廣泛，其長期使用會導(dǎo)致土壤中有不同程度的殘留。圖甲為科研人員從土壤中分離出降解樂果的菌株的流程，圖乙為降解樂果的菌株在固體培養(yǎng)基上產(chǎn)生的透明圈，透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物降解能力的大小，請回答相關(guān)問題：

（1）制備該選擇培養(yǎng)基時，應(yīng)以_____為唯一碳源，對培養(yǎng)基滅菌常用的方法是_____。

（2）培養(yǎng)基冷凝后應(yīng)將平板_____，以防冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。圖甲所示平板劃線接種的操作過程中，對接種環(huán)至少需進行_____次灼燒滅菌。

（3）挑取甲過程分離獲得的菌種制成稀釋液，采用_____法接種在培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3～4 d后觀察菌落特征和透明圈的大小，初步篩選出三種優(yōu)良降解菌株（如表）。

菌株	透明圈直徑（D）單位：mm	菌落直徑（d）單位：mm	D/d
①	22.8	15.3	1.5
②	20.7	7.7	2.7
③	8.2	7.5	1.1

根據(jù)實驗結(jié)果可以確定降解樂果能力最強的菌株是_____（填標號）。

（4）使用樂果顯色劑采用比色法檢測降解后的樂果殘留量，應(yīng)先制作系列濃度梯度的溶液進行顯色反應(yīng)，下表中3號比色管的樂果濃度應(yīng)為_____。

管號	1	2	3	4	5	6
樂果濃度/（mgL﹣1）	0					1

如果土壤溶液中樂果濃度為50 mgL﹣1，降解后約有21%的殘留量，則需要將殘留液稀釋_____（填標號：①5②10③20）倍后，再進行比色。

Answer 1

【答案】樂果 高壓蒸汽滅菌 倒置 6 稀釋涂布平板 ② 0.4mg/L ③

【解析】

選擇培養(yǎng)基只允許特定的微生物生長，所以甲圖中的選擇培養(yǎng)基應(yīng)以樂果為唯一碳源，培養(yǎng)基冷凝后應(yīng)將平板倒置，以防冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。平板劃線法一般多用于菌種的純化，對混合菌進行分離；稀釋涂布平板法一般多用于篩選菌株，可以計數(shù)，可以觀察菌落特征。乙圖中 D/d越大說明菌株的分解能力越強。

（1）為了從土壤中篩選出只能利用樂果的微生物，制備選擇培養(yǎng)基時需加樂果為唯一碳源，對培養(yǎng)基滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌。

（2）培養(yǎng)基冷凝后應(yīng)將平板倒置，以防冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。圖甲所示平板劃線接種的操作過程中，對接種環(huán)至少需進行6次灼燒滅菌。

（3）分離菌種常用的接種方法為稀釋涂布平板。分析表格數(shù)據(jù)可知，菌株②的D/d值最大，說明降解樂果能力最強。

（4）使用樂果顯色劑采用比色法檢測降解后的樂果殘留量，應(yīng)先制作系列濃度梯度的溶液進行顯色反應(yīng)，1號為0，6號為1，則1~6號比色管的樂果濃度依次為0、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mg/L。如果土壤溶液中樂果濃度為50 mgL﹣1，降解后約有21%的殘留量，則需要將殘留液稀釋20倍后，再進行比色。