Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種。

(1)研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用__________法從陸地棉基因文庫(kù)中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因。在上述引物設(shè)計(jì)時(shí)，分別在引物中加入下圖所示酶的識(shí)別序列，這樣可以用____________________酶處理兩個(gè)基因后，得到____________端(填圖中字母)相連的融合基因。

(2)將上述融合基因插入右圖所示Ti質(zhì)粒的T－DNA中，構(gòu)建________________并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含______________的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用__________培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。

(3)剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過程的目的是______________________________，進(jìn)一步篩選后培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因油菜。

(4)提取上述轉(zhuǎn)基因油菜的mRNA，在____________酶的作用下獲得cDNA，再依據(jù)________的DNA片段設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)，可判斷融合基因是否完________。

Answer 1

【答案】 PCR ClaⅠ(限制酶)和DNA連接 A、D 表達(dá)載體(或“重組質(zhì)粒”) 四環(huán)素 液體 利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞 逆轉(zhuǎn)錄 融合基因 轉(zhuǎn)錄

【解析】試題分析：本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，關(guān)鍵能夠掌握目的基因獲取的方法，能夠結(jié)合圖解中限制酶切點(diǎn)選擇合成的工具酶獲得融合基因，同時(shí)掌握目的基因?qū)�入受體細(xì)胞以及目的基因檢測(cè)與鑒定的方法等，再結(jié)合題意，就能準(zhǔn)確解答該題。

（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫(kù)中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因。在上述引物設(shè)計(jì)時(shí)，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識(shí)別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個(gè)基因后，得到A、D端相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建表達(dá)載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞。

（4）提取上述轉(zhuǎn)基因油菜的mRNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下獲得cDNA，再依據(jù)融合基因的DNA片段設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)，可判斷融合基因是否完成轉(zhuǎn)錄。