Question

【題目】普通煙草轉(zhuǎn)入抗鹽基因培育抗鹽煙草的過程如下圖所示。已知含抗鹽基因的DNA和質(zhì)粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位點(diǎn)，質(zhì)粒上另有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。請(qǐng)回答問題：

（1）構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是____________，然后對(duì)質(zhì)粒和________進(jìn)行切割，以保證它們定向連接。

（2）質(zhì)粒的基本單位是 。

（3）切割后的目的基因與質(zhì)粒由_______酶連接成重組質(zhì)粒。篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入______________________________，

理由是___________________________________________________________________。

（4）若質(zhì)粒被某一限制酶識(shí)別的序列是一GAATTC一，并在G與A之間切割。請(qǐng)畫出被切割后所形成的黏性末端

Answer 1

【答案】

（1）salⅠ、 HindⅢ酶 含抗鹽基因的DNA

（2） 脫氧核苷酸

（3）DNA連接 氨芐青霉素 因?yàn)橹亟M質(zhì)粒帶有抗氨芐青霉素基因，在添加青霉素的培養(yǎng)基中可以存活

（4）

一G↓GATCC一 一G GATCC一

→ +

一CCTAG↓G一 一CCTAG G一

【解析】

（1）分析題圖可知，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用salⅠ酶和HindⅢ酶對(duì)含抗鹽基因的外源DNA和質(zhì)粒進(jìn)行切割，這樣會(huì)形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、質(zhì)粒的自身連接，以保證目的基因和質(zhì)粒的定向連接．限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個(gè)脫氧核苷酸的脫氧核糖和磷酸之間的磷酸二酯鍵．

（2）質(zhì)粒的基本單位是脫氧核苷酸。

（3）DNA連接酶可將切割后的目的基因與質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒．根據(jù)圖中信息可知重組質(zhì)粒帶有抗氨芐青霉素基因，但四環(huán)素基因已被限制酶破壞，所以在篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌時(shí)，可在不同培養(yǎng)基中分別加入氨芐青霉素、四環(huán)素，在添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能成活，但在添加四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能成活的即為導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌．

（4）見答案。