Question

【題目】為實(shí)現(xiàn)目的基因與運(yùn)載體結(jié)合，以便在大腸桿菌中大量表達(dá)相應(yīng)的蛋白質(zhì)，研究人員進(jìn)行了如圖所示操作．請(qǐng)分析回答下列問題：

（1）圖表示用Bam H I切割含目的基因的_____________，質(zhì)粒經(jīng)相同限制酶處理后，經(jīng)_____________酶的作用獲得a，a稱作_____________．將a與感受態(tài)大腸桿菌混合后，混合物應(yīng)接種在含有________的培養(yǎng)基上．質(zhì)粒中抗氨芐青霉素基因稱為_____________，在篩選過程起作用．若要證明培養(yǎng)基是否符合實(shí)驗(yàn)要求，培養(yǎng)基上需接種_____________的感受態(tài)大腸桿菌，培養(yǎng)后不出現(xiàn)菌落則培養(yǎng)基合格。

（2）DNA分子中，一條鏈中的兩個(gè)核苷酸通過_____________相連，已知堿性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸，構(gòu)建a的過程中用該酶處理質(zhì)粒，但目的基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是__________________________． 如果要檢測(cè)目的基因 是否成功表達(dá)，須提取培養(yǎng)后大腸桿菌的______________ ， 用相應(yīng)_____________________檢測(cè)。

Answer 1

【答案】DNA片段 DNA連接酶 基因表達(dá)載體（重組質(zhì)粒） 氨芐青霉素 標(biāo)記基因 未經(jīng)質(zhì)�；旌� 磷酸二酯鍵 防止質(zhì)粒自我連接 總蛋白 抗體

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）圖表示用BamHI為限制性內(nèi)切酶，能識(shí)別特定的堿基序列，切割含目的基因的DNA片段，質(zhì)粒經(jīng)相同限制酶處理后，形成的黏性末端相同，經(jīng)DNA連接酶酶的作用獲得基因表達(dá)載體，也叫重組質(zhì)粒．由于質(zhì)粒中含有標(biāo)記基因抗氨芐青霉素基因，故將重組質(zhì)粒與感受態(tài)大腸桿菌混合后，混合物應(yīng)接種在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上。在篩選過程，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌能正常生活，而未導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌則不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生活。若要證明培養(yǎng)基是否符合實(shí)驗(yàn)要求，需設(shè)置對(duì)照試驗(yàn)，即培養(yǎng)基上需接種未經(jīng)質(zhì)粒混合的感受態(tài)大腸桿菌，培養(yǎng)后不出現(xiàn)菌落則培養(yǎng)基合格。

（2）DNA分子中，一條鏈中的兩個(gè)核苷酸通過磷酸二酯鍵相連；構(gòu)建a的過程中用堿性磷酸酶處理質(zhì)粒，但目的基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是使它們形成的黏性末端不同，防止質(zhì)粒自我連接。檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)，須提取培養(yǎng)后大腸桿菌的總蛋白，通過抗原抗體雜交試驗(yàn)，用相應(yīng)抗體檢測(cè)。