Question

【題目】EPO是促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin）的英文簡稱，是一種激素樣物質(zhì)，可促進(jìn)體內(nèi)新紅細(xì)胞生成。人類已可通過基因工程合成EPO基因，并采用中國倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來獲取產(chǎn)物。其過程如下：

請回答下列問題：

（1）從人體組織中提取EPO的mRNA，通過反轉(zhuǎn)錄得到__________，再通過PCR技術(shù)獲得大量EPO基因。

（2）供體母鼠通常情況下每次排卵8～12枚，為使其超數(shù)排卵，需注射__________激素以排出更多的卵子，培養(yǎng)到______________________（時期）與獲能的精子相遇時，精子首先發(fā)生__________反應(yīng)，穿越放射冠和透明帶，完成體外受精。

（3）①過程構(gòu)建的基因表達(dá)載體，內(nèi)部包括不可缺少的組成部分，其中__________能驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄。

（4）采用__________________________技術(shù)，將重組表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠受精卵中，將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)液成分除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽類外，還需添加__________、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，以及血清（血漿）等物質(zhì)。

（5）當(dāng)胚胎發(fā)育至____________________時期，向受體移植，為獲得更多個轉(zhuǎn)基因胚胎，要將__________進(jìn)行均等切割，否則會影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。此外，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行__________。

Answer 1

【答案】cDNA 促性腺 減數(shù)第二次分裂 頂體 啟動子 顯微注射技術(shù) 維生素 桑椹胚或囊胚 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 性別鑒定

【解析】

1.獲取目的基因的方法有基因文庫法；PCR法；人工合成法�；�因文庫分為基因組文庫和部分基因文庫，其中部分基因文庫包括cDNA文庫，cDNA是依靠mRNA反轉(zhuǎn)錄得到的。

2.轉(zhuǎn)基因動物培養(yǎng)一般包括體外受精、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植：

（1）體外受精包括：①卵母細(xì)胞的采集：a.收集方法：給母畜注射促性腺激素使其超數(shù)排卵，然后沖卵；從屠宰場得到的廢棄動物卵巢中采集卵母細(xì)胞；從活體卵巢中采集卵母細(xì)胞。

②精子的采集和獲能：a.收集方法：手握法；電刺激法；假陰道法。b.獲能方法：培養(yǎng)法（利用專用獲能培養(yǎng)液）；化學(xué)誘導(dǎo)法（利用一定濃度的肝素或鈣離子載體A23187溶液）。

③體外受精：在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫�溶液中完成受精過程。

（2）早期胚胎培養(yǎng)：在胚胎的發(fā)育培養(yǎng)液中需加入有機(jī)鹽、無機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸及血清（兩鹽、兩素、兩酸、一血清），以保證胚胎的正常生命活動。

（3）胚胎移植：一般將胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚時期即可進(jìn)行移植，在移植之前可以進(jìn)行胚胎性別鑒定確定胚胎性別，也可以進(jìn)行胚胎分割，增加胚胎數(shù)目，但是注意在分割時需要將胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，保證分割后胚胎發(fā)育正常。

（1）提取mRNA，再通過反轉(zhuǎn)錄方法得到的DNA分子并非完整基因，而是除去了內(nèi)含子以后的基因，為cDNA。

（2）動物超數(shù)排卵是利用促性腺激素處理動物，得到動物卵母細(xì)胞后，需將細(xì)胞培育至減數(shù)第二次分裂時期以準(zhǔn)備進(jìn)行受精作用，精子在與卵母細(xì)胞接觸時，首先發(fā)生頂體反應(yīng)，穿越放射冠和透明帶，頭部進(jìn)入卵母細(xì)胞，然后完成受精作用。

（3）基因表達(dá)載體包括：目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因。其中啟動子位于基因的首端,是RNA聚合酶識別并結(jié)合位點(diǎn)；終止子位于基因的末端，終止轉(zhuǎn)錄；標(biāo)記基因用來檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。

（4）動植物將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的方法是不同的，動物采用顯微注射法；植物采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法或花粉管通道法。在早期胚胎培養(yǎng)時應(yīng)在培養(yǎng)液中加入有機(jī)鹽、無機(jī)鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸及血清（兩鹽、兩素、兩酸、一血清），以保證胚胎的正常生命活動。

（5）一般將胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚時期即可進(jìn)行移植，在移植之前可以進(jìn)行胚胎分割，增加胚胎數(shù)目，但是注意在分割時需要將胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，保證分割后胚胎發(fā)育正常。也可以進(jìn)行胚胎性別鑒定確定胚胎性別，確定是否進(jìn)行移植。