Question

【題目】肉皮素（ET）是一種多肽，主要通過與靶細胞膜上的ET受體（ETA）結(jié)合而發(fā)揮生物學效應�？蒲腥藛T通過構(gòu)建表達載體，實現(xiàn)ETA基因在大腸桿菌細胞中的高效表達，其過程如下圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaI的識別序列為，限制酶XhoI的識別序列為。請據(jù)圖分析回答：

（1）進行過程①時，需要加入緩沖液、引物、dNTP和 酶等。完成過程①②③的目的是 __________。

（2）過程③和⑤中，限制酶XhoI切割DNA,使 鍵斷開，形成的黏性末端是_________。

（3）構(gòu)建的重組表達載體，目的基因上游的啟動子是 的部位，進而可驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄。除圖中已標出的結(jié)構(gòu)外，基因表達載體還應具有的結(jié)構(gòu)是 。

（4）過程⑥要CaCl2預先處理大腸桿菌，使其成為容易吸收外界DNA的 細胞。

（5）將SNAP基因表達的產(chǎn)物是一種熒光蛋白，將與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，其目的是有利于檢測 。

Answer 1

【答案】（除注明外，每空2分，共15分）

（1）反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）（1分） 獲取目的基因（ETA基因） （2）磷酸二酯

（3）RNA聚合物的識別和結(jié)合 終止子

（4）感受態(tài) （5）ETA基因能否表達及表達量

【解析】（1）過程①是以mRNA為模板合成cDNA，因此需要加入緩沖液、引物、dNTP和反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）酶等。完成過程①②③的目的是獲取目的基因（ETA基因）。

（2）過程③和⑤中，用限制酶XhoI切割DNA，其目的是獲取目的基因和切割質(zhì)粒，在此過程中，磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是。

（3）構(gòu)建的重組表達載體，目的基因上游的啟動子是RNA聚合物的識別和結(jié)合的部位，進而可驅(qū)動基因的轉(zhuǎn)錄。除圖中已標出的結(jié)構(gòu)外，基因表達載體還應具有的結(jié)構(gòu)是終止子。

（4）過程⑥要CaCl2預先處理大腸桿菌，使其成為容易吸收外界DNA的感受態(tài)細胞。

（5）SNAP基因的表達產(chǎn)物是一種熒光蛋白，因此將SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，其目的是有利于檢測ETA基因能否表達及表達量。