Question

【題目】蛋白酶在生物醫(yī)藥和日用化工等生產(chǎn)領(lǐng)域具有重要的經(jīng)濟價值。某同學(xué)為篩選產(chǎn)蛋白酶的高產(chǎn)菌株，做了如下實驗步驟(配制了下列培養(yǎng)基，在適宜條件下培養(yǎng))：

(1)為實現(xiàn)篩選目的，步驟Ⅰ所使用的培養(yǎng)基配方中，應(yīng)去除______并加入高濃度的____________。該培養(yǎng)基從功能上看屬于_______培養(yǎng)基。

(2)滅菌是否徹底或是否被污染需要檢測，檢測方法是__________。

(3)為實現(xiàn)目的菌的分離和計數(shù)，步驟Ⅱ所使用的培養(yǎng)基中還應(yīng)加入____制成平板，采用的接種方法是_____________。

Answer 1

【答案】葡萄糖蛋白質(zhì)選擇未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下放置一段時間后，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生瓊脂稀釋涂布平板法

【解析】

本題考查微生物的培養(yǎng)、分離，考查對培養(yǎng)基成分、功能、微生物分離、計數(shù)方法的理解。分離微生物，可利用選擇培養(yǎng)基，在固體培養(yǎng)表面根據(jù)菌落特征對微生物進行分離、計數(shù)。

(1)產(chǎn)蛋白酶的高產(chǎn)菌株可以蛋白質(zhì)為碳源，篩選目的菌，步驟Ⅰ所使用的培養(yǎng)基配方中，應(yīng)去除葡萄糖，并加入高濃度的蛋白質(zhì)。該培養(yǎng)基上以葡萄糖為碳源的微生物難以生長，從功能上看屬于選擇培養(yǎng)基。

(2)檢測滅菌是否徹底或是否被污染，可把未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下放置一段時間后，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。若沒有菌落產(chǎn)生，說明滅菌徹底且未被污染。

(3)進行目的菌的分離和計數(shù)，應(yīng)使用固體培養(yǎng)基，步驟Ⅱ所使用的培養(yǎng)基中應(yīng)加入瓊脂制成平板，平板劃線法只能分離微生物，不能對微生物進行計數(shù)，應(yīng)采用稀釋涂布平板法進行分離、計數(shù)。

比較項目	平板劃線法	稀釋涂布平板法
關(guān)鍵操作	接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線	①一系列的梯度稀釋②涂布平板法操作
注意事項	每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)	稀釋度要足夠高，為確保實驗成功可以增加稀釋度的范圍
菌體獲取	在具有顯著菌落特征的區(qū)域的菌落中挑取菌體	從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體
優(yōu)點	可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生物的單細胞菌落	既可以獲得單細胞菌落，又能對微生物進行計數(shù)
缺點	不能對微生物計數(shù)	操作復(fù)雜，需要涂布多個平板