Question

【題目】MseⅠ、PstⅠ、EcoRⅠ三種限制酶的識別序列及切割位點分別是GAAT↓TAATTC、C↓TGCAG、G↓AATTC，如圖1、圖2中箭頭表示相關限制酶的酶切點。圖3表示利用基因工程生產胰島素的三種途徑。圖4表示改造哺乳動物遺傳特性的三種途徑。請據圖回答問題。

（1）若要用如圖1和圖2中的質粒和外源DNA構建重組質粒，需要對質粒進行改造，構建新的限制酶切位點。在構建新的限制酶切位點的過程中需要使用哪些工具酶___________________。

（2）圖3中催化過程①的DNA連接酶的作用是促使形成_________________，導入受體細胞B常用方法_______________，④過程也可以培養(yǎng)到______________，再從培養(yǎng)液中提取。導入受體細胞C首先使用Ca2+處理使其吸收周圍的DNA分子，之后將細胞C與圖中M溶于_____________________中，完成轉化過程。

（3）獲得動物1的受體細胞通常是受精卵，哺乳動物卵原細胞減數(shù)分裂形成成熟卵子的過程中，注射促性腺激素后還需_______________的誘導下才能完成。動物2體內各體細胞的基因種類________________。上述動物的獲得均需運用_________________________技術。

（4）干細胞科技發(fā)展至今，已進入以臍帶、胎盤等組織為主要干細胞來源的全新時代。目前國內干細胞臨床研究超過半數(shù)采用臍帶或胎盤干細胞。胎盤干細胞由囊胚的________________細胞發(fā)育而來，利用胎盤干細胞具有發(fā)育全能性的特點，所以臨床上可以用于__________________，從而挽救器官衰竭的患者的生命。

Answer 1

【答案】限制酶EcoRⅠ、DNA聚合酶、DNA連接酶 磷酸二酯鍵 農桿菌轉化法 愈傷組織 緩沖液 精子 不相同 胚胎移植 滋養(yǎng)層 器官移植

【解析】

分析題圖：圖1質粒中含有限制酶PstⅠ和EcoRⅠ的切割位點，圖2含目的基因的外源DNA中含有限制酶PstⅠ、MseⅠ、EcoRⅠ的切割位點，其中EcoRⅠ酶的切割位點位于目的基因中。

（1）質粒只有EcoR I酶和Pst I酶的識別位點，外源DNA分子含有Mse I酶、EcoR I酶和Pst I酶識別位點，且切割獲得目的基因需要Mse I酶和Pst I酶，對質粒改造使，需構建新的限制酶酶切位點；首先用EcoRⅠ處理質粒；然后用DNA聚合酶處理質粒，使被切開的質粒末端連接上相應的脫氧核苷酸；再用DNA連接酶處理質粒，形成了的限制酶酶切割位點，這樣它可被MetⅠ識別。

（2）催化過程①的DNA連接酶的作用是促使磷酸二酯鍵的形成；將目的基因導入受體細胞B（植物細胞）的常用方法是農桿菌轉化法；④過程也可以培養(yǎng)到愈傷組織后再從培養(yǎng)液中提取產物；導入受體細胞C）需要用Ca2+處理使大腸桿菌處于感受態(tài)，之后將細胞C與圖中M溶于緩沖液中，完成轉化過程。

（3）使成熟卵子形成的過程是在受精過程中完成的，因此細胞只有在精子的作用下才能形成成熟卵子；動物2是由注入體細胞（含目的基因）的囊胚發(fā)育而來的，該動物含有目的基因的體細胞與其他體細胞的基因種類不同；上述動物的獲得均需運用胚胎移植技術。

（4）胎盤干細胞可來源于囊胚的滋養(yǎng)層；由于胎盤干細胞具有發(fā)育的全能性，所以臨床上可以用于器官移植，從而挽救器官衰竭的患者的生命。