Question

【題目】[生物——選修3:現(xiàn)代生物科技專題]將北極深海鰈魚科的抗凍基因（AFP）轉(zhuǎn)入番茄，可獲得耐低溫的抗凍番茄，抗凍番茄經(jīng)低溫誘導(dǎo)后可溶性蛋白均比對照明顯增加，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳可檢測到C區(qū)和B區(qū)染色加深。如圖為抗凍番茹的培育流程，請回答下列問題：

（1）①過程為基因工程操作程序中的第二個(gè)步驟____________，將AFP基因和切開的Ti質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒需要____________酶，通常將AFP基因插入Ti質(zhì)粒的____________上，有利于目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定維持和表達(dá)。

（2）②過程采用最多的方法是____________，除此之外，還有____________（答出兩種），③過程應(yīng)用的主要技術(shù)是____________。

（3）可通過聚丙烯酰肢凝膠電泳檢測抗凍植株中的可溶性蛋白，若____________，則表明AFP基因已表達(dá)成蛋白質(zhì)產(chǎn)品；也可采用____________進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的檢測。

Answer 1

【答案】 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 DNA連接 T—DNA 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法、花粉管通道法 植物組織培養(yǎng) C區(qū)和B區(qū)染色加深 低溫處理并觀察番茄的抗凍情況

【解析】試題分析：據(jù)圖分析，圖中①過程表示構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程，是基因工程的核心步驟；②過程表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（番茄細(xì)胞）的過程，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；③過程表示植物組織培養(yǎng)過程，將番茄細(xì)胞培養(yǎng)成抗凍番茄植株。

（1）根據(jù)以上分析已知，①過程表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程需要用限制酶切割AFP基因和Ti質(zhì)粒，再用DNA連接酶將兩者連接起來；一般要將目的基因插入Ti質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移DNA（T-DNA）上，有利于目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定維持和表達(dá)。

（2）②過程表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（番茄細(xì)胞）的過程，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，也可以用基因槍法、花粉管通道法。③過程表示利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將番茄細(xì)胞培養(yǎng)成抗凍番茄植株的過程。

（3）根據(jù)題干信息分析，抗凍番茄經(jīng)低溫誘導(dǎo)后可溶性蛋白均比對照明顯增加，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳可檢測到C區(qū)和B區(qū)染色加深，因此可通過聚丙烯酰肢凝膠電泳檢測抗凍植株中的可溶性蛋白，若C區(qū)和B區(qū)染色加深，則表明AFP基因已表達(dá)成蛋白質(zhì)產(chǎn)品；也可采用低溫處理并觀察番茄的抗凍情況進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的檢測。