Question

【題目】日本下村修、美國沙爾菲和美籍華人錢永健因在研究綠色熒光蛋白（GFP）等方面的突出貢獻，獲得2008年度諾貝爾化學(xué)獎。下圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖。據(jù)圖回答：

（1）綠色熒光蛋白基因在該實驗中是作為______基因。圖中過程②需要用到的工具酶有________________。

（2）限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，請寫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端：____________。

（3）過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多也最有效的方法是____________。檢測豬胎兒的DNA上是否插入了GFP基因的方法是___________________。

（4）如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達的基因一起構(gòu)建到載體上，GFP基因可以作為基因表達載體上的標記基因，其作用是_________________________________。

（5）若要在體外擴增綠色熒光蛋白基因可采用PCR技術(shù)。標準的PCR過程分為三個步驟：第一步是“高溫變性”；第二步是“低溫復(fù)性”；第三步是“中溫延伸”，需要用到_______________酶，需要的原料是_______________。

（6）在培養(yǎng)重組細胞時，培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和________等。

Answer 1

【答案】目的 限制性核酸內(nèi)切酶（或限制酶）和DNA連接酶 （或—CTAG） 顯微注射技術(shù) DNA分子雜交技術(shù) 為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因 （熱穩(wěn)定）DNA聚合（或Taq） 脫氧核苷酸 動物血清

【解析】

分析圖示：過程①表示目的基因（綠色熒光蛋白基因）的獲取，過程②表示基因表達載體的構(gòu)建，過程③表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細胞；之后的過程是：借助核移植技術(shù)將含有綠色熒光蛋白基因的豬胎兒成纖維細胞的細胞核與去核的卵母細胞重組，獲得重組細胞；借助早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)將重組細胞培養(yǎng)成早期胚胎，進而進行胚胎移植，最終獲得綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬。

(1) 圖示為綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程，其中的綠色熒光蛋白基因在該實驗中是作為目的基因。 過程②為基因表達載體的構(gòu)建，需要用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶。

(2) 限制性核酸內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端是 （或—CTAG）。

(3) 過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細胞（將目的基因?qū)�入動物細胞）時，采用最多也最有效的方法是顯微注射技術(shù)。檢測豬胎兒（轉(zhuǎn)基因生物）的DNA上是否插入了GFP基因（目的基因），可采用DNA分子雜交技術(shù)。

(4) 標記基因的作用是：鑒定受體細胞中是否含有目的基因。

(5) 采用PCR技術(shù)擴增目的基因時，需要以脫氧核苷酸為原料、在熱穩(wěn)定DNA聚合酶（或Taq酶）的催化下進行延伸。

(6) 動物細胞培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素和動物血清等。