Question

【題目】在熒光素酶中加入正確的熒光素底物就可以發(fā)熒光。熒光素酶及其合成基因在生物研究巾有著廣泛的應(yīng)用。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)熒光素酶基因可以人工合成，也可以從_____中獲取。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增熒光素酶基因是利用___的原理。

(2)限制酶是切割DNA的工具酶，下圖為含有熒光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切點(diǎn)。若需利用酶切法（只用一種酶）獲得熒光素酶基因，最應(yīng)選擇的限制酶是______

(3)熒光素酶基因常被作為基因工程中的標(biāo)記基因，其作用是________， 熒光素酶基因也可以作為將為目的基因轉(zhuǎn)入某些動(dòng)植物細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生熒光素酶。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的技術(shù)中，最常用的是____。

(4)下列關(guān)于質(zhì)粒運(yùn)載體的說(shuō)法正確的是________（多選）。

A．沒(méi)有限制酶就無(wú)法使用質(zhì)粒運(yùn)載體

B．質(zhì)粒運(yùn)載體只能在與目的基因重組后進(jìn)入細(xì)胞

C．質(zhì)粒運(yùn)載體可能是從細(xì)菌或者病毒的DNA改造的

D．質(zhì)粒運(yùn)載體的復(fù)制和表達(dá)也遵循中心法則

E．質(zhì)粒運(yùn)載體只有把目的基因整合到受體細(xì)胞的DNA中才能表達(dá)

(5)將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞，目前常用的目的基因載體是Ti質(zhì)粒，目的基因需插入到該基因載體的______上。將導(dǎo)入熒光素酶基因的植物細(xì)胞，可經(jīng)過(guò)___形成轉(zhuǎn)基因植株。

Answer 1

【答案】 基因文庫(kù) PCR MSP1 篩選出含有目的基因的細(xì)胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ACD T-DNA 植物組織培養(yǎng)

【解析】試題分析：分析圖表：含有目的基因的外源DNA分子中含有限制酶BamHⅠ、SmaⅠ、MboⅠ和MspⅠ的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，其中BamHⅠ的酶切位點(diǎn)在目的基因的中間，SmaⅠ的酶切位點(diǎn)只有一個(gè)，SmaⅠ的識(shí)別序列中含有MspⅠ的識(shí)別序列，因此要獲得目的基因可用限制酶MspⅠ切割。

（1）熒光素酶基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲取。PCR技術(shù)的原理是DNA復(fù)制。
（2）要獲得目的基因必須在目的基因的兩側(cè)相應(yīng)的酶切位點(diǎn)進(jìn)行切割，圖1中可以看出，BamHⅠ的酶切位點(diǎn)在目的基因的中間，故不可��；SmaⅠ的酶切位點(diǎn)只有一個(gè)，故不可取；根據(jù)表格可以看出，SmaⅠ的識(shí)別序列中含有MspⅠ的識(shí)別序列，因此要獲得目的基因可用限制酶MspⅠ切割。

（4）質(zhì)粒作為運(yùn)載體，必須先用同種限制酶切割，才能與目的基因整合重組，A正確；質(zhì)粒運(yùn)載體與目的基因沒(méi)有成功重組也會(huì)被導(dǎo)入受體細(xì)胞，B錯(cuò)誤；質(zhì)粒運(yùn)載體可來(lái)自細(xì)菌，病毒的DNA改造，C正確；質(zhì)粒的本質(zhì)是小型環(huán)狀DNA，其復(fù)制和表達(dá)遵循中心法則，可獨(dú)立的在受體細(xì)胞表達(dá)，D正確，E錯(cuò)誤。

（3）標(biāo)記基因的作用是將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法。

（5）農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上。將轉(zhuǎn)基因受體細(xì)胞培育成轉(zhuǎn)基因植株常用植物組織培養(yǎng)技術(shù)。