Question

【題目】hNaDC3（人鈉/二羧酸協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3）主要分布于腎臟等重要器官，它具有促進(jìn)人腎小管上皮細(xì)胞能量代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)等功能�？蒲腥藛T利用基因工程技術(shù)構(gòu)建綠色熒光蛋白與hNaDC3融合基因，并在腎小管上皮細(xì)胞中表達(dá)，以動(dòng)態(tài)觀察hNaDC3在腎小管上皮 細(xì)胞中的定位情況，為進(jìn)一步研究hNaDC3的生理功能奠定基礎(chǔ)。研究過(guò)程如圖（實(shí)驗(yàn)中使用的限制酶SacⅠ的識(shí)別序列是GAGCT↓C，限制酶SacⅡ識(shí)別序列是CCGC↓GG）。

（1）與PCR相比，過(guò)程①需要的特有的酶是___________，應(yīng)從人體___________（器官）的組織細(xì)胞中獲得模板RNA。

（2）DNA分子被SacⅠ切割后，形成的黏性末端是___________。過(guò)程②選用SacⅠ、SacⅡ分別切割hNaDC3基因和質(zhì)粒載體，可實(shí)現(xiàn)目的基因定向插入并正常表達(dá)的原因是___________。

（3）過(guò)程④將重組表達(dá)載體導(dǎo)入豬腎小管上皮細(xì)胞最常用的方法是___________。

（4）研究人員以較髙濃度的葡萄糖溶液培養(yǎng)導(dǎo)入融合基因的豬腎小管上皮細(xì)胞，一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞膜上綠色熒光明顯增強(qiáng)。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以說(shuō)明___________。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶（或反轉(zhuǎn)錄酶） 腎臟 -TCGA 兩種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端不同 顯微注射法 較高濃度葡萄糖能增強(qiáng)腎小管上皮細(xì)胞中hNaDC3基因的表達(dá)

【解析】

本題著重考查了基因工程、胚胎工程等方面的知識(shí)，意在考查考生能識(shí)記并理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系，形成一定知識(shí)網(wǎng)絡(luò)的能力，并且具有一定的分析能力和理解能力。據(jù)圖解可知，過(guò)程①表示通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因，過(guò)程②表示構(gòu)建hNaDC3基因的表達(dá)載體，過(guò)程③表示構(gòu)建綠色熒光蛋白-hNaDC3融合基因的表達(dá)載體，④表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，⑤表示目的基因的檢測(cè)和鑒定。

（1）分析圖解，圖中過(guò)程①表示通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因，因此與PCR相比，過(guò)程①需要的特有的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶（或反轉(zhuǎn)錄酶）；由于hNaDC3主要分布于腎臟，故應(yīng)從人體腎臟的組織細(xì)胞中獲得模板RNA；

（2）根據(jù)題意可知，“限制酶SacⅠ的識(shí)別序列是GAGCT↓C”，因此DNA分子被SacⅠ切割后，形成的黏性末端是-TCGA。過(guò)程②選用SacⅠ、SacⅡ分別切割hNaDC3基因和質(zhì)粒載體，兩種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端不同，可防止目的基因和質(zhì)粒載體的自身環(huán)化和質(zhì)粒與目的基因的反向連接，同時(shí)不破壞目的基因，因此可實(shí)現(xiàn)目的基因定向插入并正常表達(dá)；

（3）過(guò)程④將重組表達(dá)載體導(dǎo)入豬腎小管上皮細(xì)胞，豬腎小管上皮細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞，將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞的最常用的方法是顯微注射法；

（4）研究人員以較高濃度的葡萄糖溶液培養(yǎng)導(dǎo)入融合基因的豬腎小管上皮細(xì)胞，一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞膜上綠色熒光明顯增強(qiáng)，因控制合成綠色熒光蛋白與hNaDC3的基因連在一起，因此可以說(shuō)明較高濃度葡萄糖能增強(qiáng)腎小管上皮細(xì)胞中hNaDC3基因的表達(dá)。