【題目】下圖1為某種質(zhì)粒結(jié)構(gòu),LacZ基因編碼的酶能使無色的X—gal變?yōu)樗{(lán)色,Amp為氨芐青霉素抗性基因。圖2為目的基因的序列及其相關(guān)限制酶的識別序列和切點;卮鹣铝袉栴}

(1)若要篩選成功導(dǎo)入目的基因的重組質(zhì)粒,培養(yǎng)基中應(yīng)加入的物質(zhì)有_______________________________。構(gòu)建重組質(zhì)粒時需要的工具酶有_________________。

(2)用BamHI和BglII兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒,構(gòu)建重組質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌中,在篩選重組質(zhì)粒的培養(yǎng)基上,若大腸桿菌菌落顯藍(lán)色,說明導(dǎo)入了_____________。

(3)BamHI酶切的DNA末端與BglII酶切的DNA末端連接,連接部位的6個堿基對序列為_____________(要求寫出雙鏈)。如用BamHI酶、BglII酶和EcoRI酶對于該重組質(zhì)粒進行切割,能切開_______個切口。

(4)下圖中A、B、C、D表示利用PCR擴增目的基因過程中可能用到的四種引物,回答下列相關(guān)問題:

①PCR技術(shù)需要用到_____________酶。

②若需要擴增圖中目的基因,由于DNA復(fù)制時,子鏈只能由5′向3′方向延伸,則利用PCR技術(shù)擴增該基因時需要選擇_____________(A、B、C、D)的組合作為引物。

【答案】氨芐青霉素 X—gal 限制酶和DNA連接酶 不含目的基因的質(zhì)粒(或空白質(zhì)粒) 2 Tag酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶) B和C

【解析】

1、用BamH IBgl II兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒,質(zhì)粒中Lac Z基因被破壞,氨芐青霉素抗性基因完好。

2BamH I酶切的DNA 末端與Bgl II酶切的DNA末端連接,連接部位的6個堿基對序列為BamH I酶和Bgl II酶均不能識別和切割。

1)由圖1可知,質(zhì)粒中含有,Lac Z基因和Amp基因(即氨芐青霉素抗性基因)。由圖2可知,可BamH I且切割質(zhì)粒,Lac Z基因被破壞,無法使無色的X—gal變?yōu)樗{(lán)色,顯白色。因此,在培養(yǎng)基中應(yīng)加入的物質(zhì)有氨芐青霉素和X—gal,只有成功導(dǎo)入目的基因的重組質(zhì)粒的細(xì)菌才能不被氨芐青霉素殺死,同時表現(xiàn)為白色。構(gòu)建重組質(zhì)粒時需要的工具酶有限制酶和DNA連接酶。

2)用BamH IBgl II兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒,質(zhì)粒中Lac Z基因被破壞,無法使無色的X—gal變?yōu)樗{(lán)色,顯白色。因此,在篩選重組質(zhì)粒的培養(yǎng)基上,若大腸桿菌菌落顯藍(lán)色,說明導(dǎo)入了空白質(zhì)粒。

3BamH I限制酶的識別和切割位點為,Bgl II限制酶的識別和切割位點為,因此BamH I酶切的DNA 末端與Bgl II酶切的DNA末端連接,連接部位的6個堿基對序列為。重組質(zhì)粒如下圖所示,用BamH I酶、Bgl II酶和EcoR I酶對于該重組質(zhì)粒進行切割,能在BamH IEcoR I的切割位點上切割,BamH I酶切的DNA 末端與Bgl II酶切的DNA末端連接部位不能被識別和切割,因此能切開2個切口。

4)①PCR技術(shù)需要用到Tag酶。

②若需要擴增圖中目的基因,由于DNA復(fù)制時,子鏈只能由5′3′方向延伸,則利用PCR技術(shù)擴增該基因時需要選擇BC的組合作為引物。

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(2)若Ⅰ-3 無乙病致病基因,請繼續(xù)以下

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