40．【生物—選修3：現(xiàn)代生物科技專題】（15分）

       使用DNA重組技術(shù)，把天然或人工合成的遺傳物質(zhì)定向插入細(xì)菌、酵母菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，使之充分表達(dá)，經(jīng)純化后而制得的疫苗稱為基因工程疫苗。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面A蛋白為主要抗原，其基因工程疫苗生產(chǎn)流程如圖30。請(qǐng)回答：

       （1）過(guò)程①表示             。

（2）可能利用               技術(shù)擴(kuò)增獲得A基因。使用該技術(shù)的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列來(lái)合成           。還需要有耐熱的         酶。擴(kuò)增時(shí)DNA解鏈的溫度應(yīng)控制在        ℃。而互補(bǔ)鏈延伸時(shí)的溫度應(yīng)控制在           ℃。

（3）過(guò)程③構(gòu)建A基因重組載體時(shí)，除了A基因外，還必須有      、     和      基因等。這一過(guò)程需要使用            和               這兩種工具酶。

（4）過(guò)程④中選用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，最常見的轉(zhuǎn)化方法是：用              處理，得到          細(xì)胞，再將經(jīng)過(guò)處理的細(xì)胞與溶有A基因重組表達(dá)載體的緩沖溶液混合，并控制在一定的溫度使之完成轉(zhuǎn)化。

（5）可用             技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞菌的DNA上是否插入了A基因，要檢測(cè)A基因是否成功表達(dá)還需檢測(cè)受體細(xì)菌                   。

（選修三）2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面作出突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家。綠色熒光蛋白能在藍(lán)光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動(dòng)情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能。GFP基因可作為目的基因用于培育綠色熒光小鼠，圖中表示培育綠色熒光小鼠的基本流程：

請(qǐng)根據(jù)上述材料回答下列問(wèn)題。

（1）培育綠色熒光小鼠的過(guò)程用到了哪些現(xiàn)代生物技術(shù)？

（2）用于培育綠色熒光小鼠的基因表達(dá)載體的組成必須有啟動(dòng)子、終止子和　　　。圖中過(guò)程②常用的方法是　　　　；在進(jìn)行過(guò)程④前，利用　　　　技術(shù)可以獲得數(shù)目更多且基因型相同的綠色熒光小鼠。

（3）GFP基因與目的基因一起構(gòu)建到載體上不影響目的基因表達(dá)，也不影響由目的基因控制合成的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能，且對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用，因此GFP基因可以作為基因表達(dá)載體上的　　　　　。

（4）目前科學(xué)家通過(guò)　　　　工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白、黃色熒光蛋白等，該工程是直接改造GFP分子還是改造GFP基因？　　　　。請(qǐng)寫出該工程的基本流程：