Question

【題目】Graves�。�GD）可導致甲狀腺功能亢進。研究發(fā)現(xiàn)，GD患者甲狀腺細胞表面表達大量細胞間粘附分子1（ICAM-1），導致甲狀腺腫大�？蒲腥藛T通過制備單克隆抗體，對治療GD進行了嘗試。

（1）用ICAM-1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠，幾周后取這些免疫小鼠的血清，分別加入多孔培養(yǎng)板的不同孔中，多孔培養(yǎng)板中需加入________以檢測這些小鼠產(chǎn)生的抗體。依據(jù)反應結(jié)果，選出抗原-抗體反應最________（強/弱）的培養(yǎng)孔所對應的小鼠M。

（2）取小鼠M的脾臟細胞制備成細胞懸液，與實驗用骨髓瘤細胞進行融合，用選擇培養(yǎng)基篩選得到具有________能力的細胞。核苷酸合成有兩個途徑，物質(zhì)A可以阻斷其中的全合成途徑（如下圖）。正常細胞內(nèi)含有補救合成途徑所必需的轉(zhuǎn)化酶和激酶，制備單克隆抗體時選用的骨髓瘤細胞中缺乏轉(zhuǎn)化酶。可用加入H、A、T三種物質(zhì)的“HAT培養(yǎng)基”篩選特定的雜交瘤細胞。

融合前將部分培養(yǎng)細胞置于含HAT的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時間后培養(yǎng)基中________（有/無）骨髓瘤細胞生長，說明培養(yǎng)基符合實驗要求。雜交瘤細胞可以在HAT培養(yǎng)基上大量繁殖的原因是________________。

（3）將獲得的上述細胞在多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，用ICAM-1檢測，從中選擇________的雜交瘤細胞，植入小鼠腹腔中克隆培養(yǎng)，一段時間后從小鼠腹水中提取實驗用抗體。

（4）若進一步比較實驗用抗體和131I對GD模型小鼠的治療作用，可將若干GD模型小鼠等分為三組，請補充下表中的實驗設(shè)計。

對照組（A）	131I治療組（B）	單克隆抗體治療組（C）
給GD模型小鼠腹腔注射0．1mL無菌生理鹽水	給GD模型小鼠腹腔注射溶于0．1mL無菌生理鹽水的131I	________

Answer 1

【答案】ICAM-1 強 無限增殖 無 雜交瘤細胞可以進行補救合成途徑 大量產(chǎn)生抗ICAM-1抗體 給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體

【解析】

1、單克隆抗體：由單個B淋巴細胞進行無性繁殖形成的細胞系所產(chǎn)生出的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。具有特異性強、靈敏度高，并能大量制備的特點。

2、單克隆抗體的制備過程：首先用特定抗原注射小鼠體內(nèi)，使其發(fā)生免疫，小鼠體內(nèi)產(chǎn)生具有免疫能力的B淋巴細胞，利用動物細胞融合技術(shù)將免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合。單克隆抗體制備過程中的兩次篩選：第一次篩選，利用特定選擇培養(yǎng)基篩選，獲得雜交瘤細胞，即AB型細胞（A為B淋巴細胞，B為骨髓瘤細胞），不需要A、B、AA、BB型細胞；第二次篩選，利用多孔板法和抗原-抗體雜交法篩選，獲得產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。

（1）抗原和抗體結(jié)合具有特異性，多孔培養(yǎng)板中需加入ICAM-1以檢測小鼠是否產(chǎn)生抗ICAM-1的抗體。依據(jù)反應結(jié)果，選出陽性（或“抗原-抗體”）反應最強的培養(yǎng)孔所對應的小鼠M。

（2）B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后具備了骨髓瘤細胞無限增殖的特點。制備單克隆抗體時選用的骨髓瘤細胞中缺乏轉(zhuǎn)化酶，無法進行補救合成途徑，且物質(zhì)A阻斷了全合成途徑，故在HAT培養(yǎng)基中無骨髓瘤細胞生長。雜交瘤細胞含有補救合成途徑所必需的轉(zhuǎn)化酶和激酶，可以進行補救合成途徑，可以在HAT培養(yǎng)基上大量繁殖。

（3）根據(jù)抗原和抗體結(jié)合的特異性，用ICAM-1檢測，從中選擇大量產(chǎn)生抗ICAM-1抗體的雜交瘤細胞，植入小鼠腹腔中克隆培養(yǎng)，一段時間后從小鼠腹水中提取實驗用抗體。

（4）根據(jù)題干中實驗目的“比較實驗用抗體和131I對GD模型小鼠的治療作用”，依據(jù)實驗的單一變量原則，單克隆抗體治療組（C）中應給GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL無菌生理鹽水的抗ICAM-1單克隆抗體。