Question

【題目】胰島素是治療糖尿病的重要藥物．現(xiàn)利用基因工程技術讓大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素．圖為大腸桿菌質粒，tetR和ampR分別是四環(huán)素抗性基因和青霉素抗性基因．請據(jù)圖作答．

（1）獲取目的基因時，應從人的（基因組/cDNA）文庫中獲取，這樣做的原因是 ． 假設人胰島素基因中不含EcoRI、BamHI和Hind III限制酶的酶切位點，在獲取目的基因后，應在目的基因兩端添加的識別序列再進行酶切，就能保證把目的基因定向插入到質粒中，而且還能防止目的基因 ．
（2）在重組成功后，將重組質粒導入大腸桿菌常用法；選用大腸桿菌作受體細胞的原因是 ．
（3）天然人胰島素不耐儲存，可使用蛋白質工程對蛋白質進行改造．蛋白質工程的基本途徑為：→設計預期的蛋白質結構→→找到相應的脫氧核苷酸序列．

Answer 1

【答案】
（1）cDNA；cDNA（中無內含子序列，）能夠在大腸桿菌中表達出正確的蛋白質；BamH I 和EcoR I限制酶；自身環(huán)化
（2）感受態(tài)細胞（Ca2+處理細胞）；繁殖快、是單細胞、遺傳物質相對較少等
（3）從預期的蛋白質功能出發(fā)；推測應有的氨基酸序列
【解析】解：（1）分析題意可知，受體細胞為大腸桿菌，由于大腸桿菌屬于原核生物，原核生物基因中沒有內含子，因此獲取目的基因時，應從人的cDNA文庫中獲取，這樣做能夠在大腸桿菌中表達出正確的蛋白質．假設人胰島素基因中不含EcoRI、BamHI和Hind III限制酶的酶切位點，在獲取目的基因后，應在目的基因兩端添加BamH I 和EcoR I限制酶的識別序列再進行酶切，就能保證把目的基因定向插入到質粒中，而且還能防止目的基因自身環(huán)化．（2）在重組成功后，將重組質粒導入大腸桿菌常用感受態(tài)細胞（Ca2+處理細胞）法；選用大腸桿菌作受體細胞的原因是繁殖快、是單細胞、遺傳物質相對較少等．（3）天然人胰島素不耐儲存，可使用蛋白質工程對蛋白質進行改造．蛋白質工程的基本途徑為：從預期的蛋白質功能出發(fā)→設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→找到相應的脫氧核苷酸序列．
所以答案是：（1）cDNA cDNA（中無內含子序列，）能夠在大腸桿菌中表達出正確的蛋白質 BamH I 和EcoR I限制酶 自身環(huán)化（2）感受態(tài)細胞（Ca2+處理細胞） 繁殖快、是單細胞、遺傳物質相對較少等（3）從預期的蛋白質功能出發(fā) 推測應有的氨基酸序列
【考點精析】通過靈活運用基因工程的原理及技術，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術即可以解答此題．