【題目】下圖為獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米的技術(shù)路線，請回答：

（1）構(gòu)建表達(dá)載體選擇限制性核酸內(nèi)切酶時(shí)，要求Ti質(zhì)粒內(nèi)每種限制性核酸內(nèi)切酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)，同時(shí)要求酶切后，G基因形成的兩個(gè)粘性末端序列不相同，這個(gè)過程需用______種限制酶，目的是___________。除草劑抗性基因G和Ti質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是________________________

（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時(shí)，T-DNA攜帶_______________插入受體細(xì)胞的核DNA。若核DNA中僅插入一個(gè)G基因，自交后代含G基因的植株中，純合子占________________。

（3）獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米涉及到多次篩選，其中篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌應(yīng)使用含_______________的選擇培養(yǎng)基，使用含_______________的選擇培養(yǎng)基篩選出轉(zhuǎn)化的愈傷組織，再誘導(dǎo)愈傷組織再生出抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米。

【答案】2 防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化 磷酸二酯鍵 抗除草劑基因G 1/3 抗生素 除草劑

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)-抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，為了防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，需要使用2種不同的限制酶對目的基因（除草劑抗性基因G）和質(zhì)粒進(jìn)行切割；DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵。

（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時(shí)，T-DNA攜帶目的基因（除草劑抗性基因G）插入受體細(xì)胞的核DNA；若核DNA中僅插入一個(gè)G基因，則轉(zhuǎn)基因植株相當(dāng)于雜合子，其自交后代含G基因的植株中，純合子占1/3。

（3）據(jù)圖分析，圖示質(zhì)粒上的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因，因此篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌應(yīng)使用含抗生素的選擇培養(yǎng)基；應(yīng)該使用含除草劑的選擇培養(yǎng)基篩選出轉(zhuǎn)化的愈傷組織，再誘導(dǎo)愈傷組織再生出抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米。

練習(xí)冊系列答案
相關(guān)習(xí)題

科目：高中生物 來源： 題型：

【題目】農(nóng)作物遭受洪水長時(shí)間浸泡會(huì)出現(xiàn)爛根而死亡，原因是根細(xì)胞厭氧呼吸產(chǎn)生的乙醇對細(xì)胞有毒害作用。乙醇對動(dòng)物神經(jīng)行為能力也有影響。

（1）根細(xì)胞厭氧呼吸除產(chǎn)生乙醇外還產(chǎn)生的物質(zhì)有________________，該過程發(fā)生的場所是_____________________________。

（2）有研究表明藥物A能加快動(dòng)物體內(nèi)酒精的代謝，從而降低體內(nèi)的酒精濃度，減緩酒精對動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)的損害和神經(jīng)活動(dòng)的影響。在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該結(jié)論時(shí)，實(shí)驗(yàn)中自變量是________________，檢測指標(biāo)是___________________。

（3）為研究不同酒精濃度及處理時(shí)間對生長狀況相似細(xì)胞的毒害作用，請幫助某生物興趣小組完成實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)材料：洋蔥、質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%的酒精溶液、蒸餾水、0.3 g/mL的蔗糖溶液、吸水紙、載玻片、蓋玻片。

（要求：答題時(shí)對酒精溶液的具體配制、待觀察裝片的具體制作不作要求）

實(shí)驗(yàn)思路：____________

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與如下圖所示。

a．通過觀察細(xì)胞是否發(fā)生________，來判斷植物細(xì)胞的死活，進(jìn)而來了解酒精對生長狀況相似的不同細(xì)胞的毒害作用。

b．試?yán)L出不同濃度酒精溶液作用細(xì)胞2．5a分鐘時(shí)質(zhì)壁分離細(xì)胞所占百分率坐標(biāo)曲線圖。_________

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科目：高中生物 來源： 題型：

【題目】如圖為某單基因遺傳病的家系圖，已知Ⅱ1的家族中不存在該致病基因，下列敘述正確的是（ ）

A.該病是伴X隱性遺傳病

B.Ⅱ4與Ⅰ2基因型相同的概率為2/3

C.若甲為正常男孩，則甲攜帶該致病基因的概率為7/17

D.若Ⅱ3與Ⅱ1家族中一正常男性婚配，所生男孩均患病

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科目：高中生物 來源： 題型：

【題目】同位素可用于追蹤物質(zhì)的運(yùn)行和變化規(guī)律，下列這些同位素示蹤實(shí)驗(yàn)中結(jié)果描述正確的是（ ）

A.給馬鈴薯提供14CO2，則其塊莖細(xì)胞在缺氧狀態(tài)有可能出現(xiàn)14C2H5OH

B.給洋蔥根尖細(xì)胞提供含3H-尿嘧啶核糖核苷酸，只能在分生區(qū)細(xì)胞中檢測到放射性

C.利用15N標(biāo)記某丙氨酸，附著在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體將出現(xiàn)放射性，而游離的核糖體無放射性

D.小白鼠吸入18O2，則在其尿液中可以檢測到H218O，呼出的CO2也可能含有18O

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科目：高中生物 來源： 題型：

【題目】回答與分離以尿素為氮源的微生物有關(guān)的問題：

（1）有些細(xì)菌含有_________，它們可以通過降解尿素作為其生長的氮源。請用化學(xué)反應(yīng)式表示這類細(xì)菌降解尿素的過程____________________。

（2）本實(shí)驗(yàn)需通過比較尿素固體培養(yǎng)基和 LB 固體培養(yǎng)基菌上的落數(shù)，了解土壤稀釋液中能以尿素為氮源的微生物的比例，因此要用____________（填方法）進(jìn)行接種。配置培養(yǎng)基時(shí)選擇瓊脂糖作為凝固劑的原因是___________。尿素溶液的滅菌選擇的方法是______。

（3）已知氨與納氏試劑反應(yīng)生成淡紅色絡(luò)合物。為了定量測定所分離的微生物對尿素的降解能力，可選用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，并利用光電比色法測定培養(yǎng)液 NH3 的含量。步驟如下：第一步，預(yù)實(shí)驗(yàn)。將培養(yǎng)液過濾和脫色處理后，用納氏試劑顯色處理。用光程為 1cm 的比色杯在 570nm 處測定光密度值。若光密度值偏低，應(yīng)選擇____（ A．增大光程，光波長不變B．增大光程，光波長增加 C．減小光程，光波長不變 D．減小光程，光波長增加）處再次測定光密度值， 直到數(shù)據(jù)適宜為止。第二步，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。用蒸餾水配制______，與納氏試劑反應(yīng)后，用比色計(jì)測定，并制作____________的標(biāo)準(zhǔn)曲線。第三步，樣品處理。將培養(yǎng)液過濾后，進(jìn)行脫色處理，用納氏試劑顯色處理。

第四步，樣品測定與計(jì)算。

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科目：高中生物 來源： 題型：

【題目】圖為某高等動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)一對同源染色體的示意圖（圖中1-8表示基因）。下列敘述正確的是（ ）

A.基因1和3屬于一對等位基因

B.基因6和7，在減I前期有可能發(fā)生基因重組

C.基因5和6如果不同，則一定是基因突變的結(jié)果

D.基因3和4分離的時(shí)期，不同分裂方式的細(xì)胞中染色體數(shù)目不同

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科目：高中生物 來源： 題型：

【題目】血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要成分，負(fù)責(zé)血液中O2或CO2的運(yùn)輸。下面是血紅蛋白的提取和分離的流程圖。回答下列問題。

（1）紅細(xì)胞中血紅蛋白的作用，體現(xiàn)了蛋白質(zhì)的_________功能。

（2）提取血紅蛋白最好用哺乳動(dòng)物的紅細(xì)胞，主要原因是__________。采集新鮮血液前，要在采血容器中加入檸檬酸鈉溶液，其目的是____________________。

（3）紅細(xì)胞的洗滌要用_____________反復(fù)沖洗、離心，洗滌好的紅細(xì)胞在蒸餾水和甲苯的作用下破裂，釋放出血紅蛋白。將分離的血紅蛋白溶液進(jìn)行透析的目的是去除___________的雜質(zhì)。

（4）凝膠色譜法是根據(jù)__________________分離蛋白質(zhì)的有效方法。血紅蛋白呈紅色這一特點(diǎn)在凝膠色譜法分離血紅蛋白中的作用是_______________________。

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科目：高中生物 來源： 題型：

【題目】下圖是分離煙草原生質(zhì)體的過程，下列說法錯(cuò)誤的是（ ）

A.制備原生質(zhì)體的葉片應(yīng)采用高壓蒸汽法進(jìn)行消毒

B.制備原生質(zhì)體的酶溶液可能含纖維素酶和果膠酶

C.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板是檢測原生質(zhì)體密度的工具之一

D.分裂出的煙草原生質(zhì)體可用于植物體細(xì)胞雜交

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科目：高中生物 來源： 題型：

【題目】閱讀下列材料，回答（1）～（4）題。

腫瘤細(xì)胞中相關(guān)基因甲基化修飾調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬過程

細(xì)胞自噬是真核生物對細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行周轉(zhuǎn)的重要過程。細(xì)胞自噬過程中，一些損傷的蛋白或細(xì)胞器被雙層膜結(jié)構(gòu)包裹后形成自噬體，與溶酶體（動(dòng)物）或液泡（酵母和植物）融合后，其內(nèi)的物質(zhì)被降解后得以循環(huán)利用。下圖表示細(xì)胞內(nèi)自噬體的形成及溶酶體參與自噬的過程。

細(xì)胞自噬過程受到自噬相關(guān)基因調(diào)控， 但是這些基因的表達(dá)過度上調(diào)會(huì)導(dǎo)致自噬異常激活， 最終引起“自噬性細(xì)胞死亡”。細(xì)胞自噬在細(xì)胞廢物清除、結(jié)構(gòu)重建、生長發(fā)育中起重要作用， 而自噬功能紊亂則會(huì)導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、神經(jīng)退行性疾病和微生物感染等問題。

在機(jī)體腫瘤發(fā)生早期， 細(xì)胞自噬促進(jìn)癌細(xì)胞發(fā)生凋亡以抑制腫瘤發(fā)生；而在腫瘤發(fā)生晚期，惡性腫瘤增殖達(dá)到相當(dāng)數(shù)量時(shí)， 腫瘤細(xì)胞要借助細(xì)胞自噬作用對抗?fàn)I養(yǎng)缺乏和缺氧以及放射造成的損傷。腫瘤細(xì)胞抑癌基因DNA甲基化（有多個(gè)堿基上連接甲基基團(tuán)）可能具有調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬的作用。

NOR1是一種抑癌基因，鼻咽癌細(xì)胞中NOR1的啟動(dòng)子呈高度甲基化狀態(tài)，導(dǎo)致NOR1蛋白含量很低。當(dāng)用DNA甲基抑制劑處理鼻咽癌細(xì)胞后，NOR1表達(dá)得到恢復(fù)，抑制了自噬體囊泡的形成， 癌細(xì)胞的自噬作用受到抑制， 能量代謝和細(xì)胞活性下降，癌細(xì)胞的增殖和生存能力降低。

抑癌基因PCDH17在胃和結(jié)腸直腸細(xì)胞中表達(dá)正常， 而在胃癌和結(jié)腸直腸癌細(xì)胞中高度甲基化而近乎沉默。研究表明，PCDH17低表達(dá)與其基因甲基化及蛋白乙�；嘘P(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)細(xì)胞中PCDH17基因過量表達(dá)后，多個(gè)自噬相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞自噬作用增強(qiáng)，癌細(xì)胞中發(fā)生自噬性細(xì)胞死亡的比例上升，從而達(dá)到抑癌效果。

（1）圖示細(xì)胞自噬過程中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜由于具有____________的特點(diǎn)，可將損傷的細(xì)胞器包裹成自噬體。自噬體與溶酶體融合后，其內(nèi)的多種____________將損傷細(xì)胞器降解以循環(huán)利用。

（2）分析文中“鼻咽癌細(xì)胞中NOR1的啟動(dòng)子呈高度甲基化狀態(tài)，導(dǎo)致NOR1蛋白含量很低”的原因是_______________。

（3）結(jié)合文中信息，簡要說明抑癌基因NOR1和PCDH17抑制細(xì)胞癌變的作用機(jī)制分別是______________、_______________。

（4）除文中提到的兩個(gè)抑癌基因的作用機(jī)制外，結(jié)合所學(xué)知識，推測抑癌基因還可以通過調(diào)控哪些途徑達(dá)到抑制細(xì)胞癌變的作用_______________。（提出一點(diǎn)即可）

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