Question

【題目】基因打靶技術(shù)是建立在基因同源重組技術(shù)以及胚胎干細胞技術(shù)的基礎上而發(fā)展起來的一種分子生物學技術(shù).結(jié)合圖示回答問題。

注: neor是新霉素抗性基因;

HSV-tk和neor基因在同一DNA分子上時會表達，可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì),導致細胞死亡.

(1)打靶載體測序驗證正確后,利用__________酶,將之線性化,以提高重組率.通過__________技術(shù)導入胚胎干細胞,這樣打靶載體與細胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有幾率發(fā)生同源重組.為了篩選發(fā)生同源重組的細胞,可在培養(yǎng)液中加入____________________ .

(2)將打靶成功的細胞注射入小鼠囊胚,移植到同種、_________的母鼠體內(nèi),一段時間后對受體母鼠進行___________檢查,確保其生下嵌合小鼠.這種嵌合體小鼠長大后,體內(nèi)同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因.如果某些小鼠的___________(選填“體細胞”、“生殖細胞”)恰巧被“修飾”過了,則它們的雜交后代中,就可能出現(xiàn)基因完全被“修飾”過的小鼠.

Answer 1

【答案】 限制 顯微注射 新霉素和丙氧鳥苷 生理狀態(tài)相同（或經(jīng)同期發(fā)情） 妊娠 生殖細胞

【解析】基因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲取→基因表達載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)�入受體細胞（將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法）→目的基因的檢測與鑒定。

(1)分析題圖可知，將目的基因和與細胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到載體(或質(zhì)粒)上，構(gòu)建打靶載體(基因表達載體)。打靶載體測序驗證正確后，利用限制酶，將之線性化，以提高重組率。通過顯微注射技術(shù)導入胚胎干細胞，這樣打靶載體與細胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有幾率發(fā)生同源重組。結(jié)合題意：neor是新霉素抗性基因和HSV-tk基因的表達可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì)，導致細胞死亡，因此為了篩選發(fā)生同源重組的細胞，可在培養(yǎng)液中加入新霉素和丙氧鳥苷；最后還需要通過DNA分子雜交技術(shù)鑒定同源重組的細胞(去除靶基因)，將這樣的細胞通過動物細胞(或克隆)培養(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細胞。

(2)將打靶成功的細胞注射入小鼠囊胚，移植到同種、生理狀態(tài)相同(或經(jīng)同期發(fā)情)的母鼠體內(nèi)，一段時間后對受體母鼠進行妊娠檢查，確保其生下嵌合小鼠。這種嵌合體小鼠長大后，體內(nèi)同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因。如果某些小鼠的生殖細胞恰巧被“修飾”過了，則它們的雜交后代中，就可能出現(xiàn)基因完全被“修飾”過的小鼠。