Question

【題目】下圖是從酵母菌獲取某植物需要的某種酶基因的流程，結(jié)合所學(xué)知

識(shí)及相關(guān)信息回答下列問(wèn)題：

（1）圖中cDNA文庫(kù) 基因組文庫(kù)（填“大于”、“等于”或者“小于”）。

（2）①過(guò)程提取的DNA需要 的切割，B過(guò)程是 。

（3）為在短時(shí)間內(nèi)大量獲得目的基因，可用 擴(kuò)增的方法。目的基因獲取之后，需要進(jìn)行 ，其組成必須有 以及標(biāo)記基因等，此步驟是基因工程的核心。

（4）將該目的基因?qū)�入某雙子葉植物細(xì)胞，常采用的方法是 ，其能否在此植物體內(nèi)穩(wěn)定遺傳可以用 技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。

Answer 1

【答案】（1）小于 （2）限制酶 反轉(zhuǎn)錄

（3）PCR技術(shù) 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 啟動(dòng)子、終止子、目的基因（復(fù)制原點(diǎn)可不答）

（4）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 DNA分子雜交

【解析】

1、基因文庫(kù)是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入到受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因。包括基因組文庫(kù)（包含某種生物所有的基因）和部分基因文庫(kù)（包含某種生物的部分基因，如cDNA文庫(kù)）。

2、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因（適用于目的基因的核苷酸序列已知的情況）。PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，其原理是DNA復(fù)制，需要模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），以指數(shù)的方式擴(kuò)增，即約2n。

3、基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用。基因表達(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。

4、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，如受體細(xì)胞是植物細(xì)胞，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（約80%的轉(zhuǎn)基因植物都是用這種方法獲得的），具體過(guò)程：目的基因插人Ti質(zhì)粒的T-DNA上→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→目的基因整合到植物細(xì)胞染色體上→目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)。另外，還可用基因槍法和花粉管通道法；如果受體細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞，常用顯微注射技術(shù)；如果受體細(xì)胞是微生物細(xì)胞，用Ca2+處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合（在緩沖液中）→一定溫度下，感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化。

（1）基因組文庫(kù)是指將某生物的全部基因組DNA切割成一定長(zhǎng)度的DNA片段克隆到某種載體上形成的集合；而cDNA文庫(kù)是由mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的基因組成的，由于基因的選擇性表達(dá)，所以來(lái)自所以cDNA文庫(kù)小于基因組文庫(kù)。

（2）從供體細(xì)胞中的DNA中獲取目的基因，首先應(yīng)用限制酶將目的基因從其所在的DNA分子上切割下來(lái)；B過(guò)程是以mRNA為模版來(lái)合成DNA的，應(yīng)為反轉(zhuǎn)錄（或逆轉(zhuǎn)錄）過(guò)程。

（3）PCR技術(shù)是一種體外擴(kuò)增DNA的方法，其原理為DNA復(fù)制，能將得到的目的基因在細(xì)胞外大量擴(kuò)增；目的基因獲取之后，需要進(jìn)行基因表達(dá)載體的構(gòu)建；其組成必須有目的基因、啟動(dòng)子和終止子以及標(biāo)記基因等，此步驟是基因工程的核心。

（4）將目的基因?qū)�入某雙子葉植物細(xì)胞常采用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，目的基因只有整合到植物細(xì)胞的染色體上才能在植物體內(nèi)穩(wěn)定遺傳，可通過(guò)DNA分子雜交的方法對(duì)目的基因是否整合到染色體上進(jìn)行檢測(cè)。