Question

【題目】回答下列有關基因表達和生物工程問題。

(1）基因工程是生物工程核心技術。下列是分子實驗室中構建產(chǎn)生胰島素基因工程菌的部分操作，正確流程是____________。（用題中編號排序）

①篩選含有胰島素基因的受體細胞 ②胰島素基因與運載體重組

③重組DNA導入受體細胞 ④獲取胰島素基因

下圖所示為用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因(4kb，lkb=1000個堿基對長度)及其上DNA片段示意圖。

(2）片段D為目的基因中的某一片段，有關敘述正確的是_________（多選）。

A.若圖中的ACT能決定一個氨基酸，則ACT可稱為一個密碼子

B.DNA連接酶作用于②處，DNA解旋酶作用于①處

C.若只用片段D中的3個堿基對，則可以排列出43種片段

D.同一脫氧核苷酸鏈中相鄰的兩個堿基之間依次經(jīng)過“一脫氧核糖—磷酸基—脫氧核糖—”連接

下圖所示為三種質(zhì)粒示意圖。圖中AP為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因。EcoRⅠ(0.7Kb)、PvuⅠ(0.8Kb)等為限制酶及其切割的位點與復制原點的距離。復制原點是在基因組上復制起始的一段序列，是指質(zhì)粒在受體細胞中復制時的起點。

(3）圖中質(zhì)粒A、質(zhì)粒C能否作為目的基因運載體最理想的質(zhì)粒？__________(能/否)。為什么，

請說明理由 __________________________________________________________________.

(4）用EcoRⅠ完全酶切目的基因和質(zhì)粒B形成的重組質(zhì)粒（EcoRⅠ在目的基因和質(zhì)粒上的酶切位點如上兩圖所示)，則進行電泳后觀察可出現(xiàn)長度為1.1kb和_____kb,或者分別是_____kb和______kb兩個片段。（重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點與EcoRⅠ的識別位點之間的堿基對忽略不計）。

Answer 1

【答案】 ④②③① BD 否 質(zhì)粒A缺少標記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質(zhì)粒的自主復制 5.6 3.1 3.6

【解析】【試題分析】

1.基因工程的基本操作程序是：目的基因的獲取→基因表達載體的構建→將目的基因?qū)�入受體細胞→目的基因的檢測與鑒定。

2. 本題主要是對基因表達載體的構建的相關知識進行綜合考查，有一定的難度。需要考生對所學知識進行歸納梳理、把握知識的內(nèi)在聯(lián)系，再結合題意，一步一步認真作答，才能順利解題。

（1）根據(jù)基因工程的基本操作程序可推知，構建產(chǎn)生胰島素基因工程菌的流程是④獲取胰島素基因、②胰島素基因與運載體重組、③重組DNA導入受體細胞、①篩選含有胰島素基因的受體細胞。

（2）密碼子是由DNA轉錄形成的信使RNA分子上的三個連續(xù)堿基組成的，若圖中的ACT能決定一個氨基酸，則其對應的密碼子是UGA，A項錯誤；DNA連接酶作用于②磷酸二酯鍵處，DNA解旋酶作用于①氫鍵處，B項正確；若只用片段D中的3個堿基對（堿基對已經(jīng)確定，而且是三種不同的堿基對），則可以排列出3×2×1＝6種片段，C項錯誤；結合圖示可知，同一脫氧核苷酸鏈中相鄰的兩個堿基之間依次經(jīng)過“一脫氧核糖—磷酸基—脫氧核糖—”連接，D項正確。

（3）據(jù)圖可知，質(zhì)粒A缺少標記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質(zhì)粒的自主復制。因此，圖中質(zhì)粒A、質(zhì)粒C不能作為目的基因運載體最理想的質(zhì)粒。

（4）據(jù)圖可知，目的基因中除了有限制酶（PvuⅠ）的切點外，還存在一個限制酶EcoRⅠ的切割位點，可以把目的基因切割成1.0kb和3.0kb兩種長度的片段。用EcoRⅠ完全酶切目的基因和質(zhì)粒B形成的重組質(zhì)粒，則進行電泳后觀察可出現(xiàn)長度為0.1＋1.0＝1.1kb（質(zhì)粒切割后形成的小的片段＋切割目的基因時形成的小片段）和2.7－0.1＋3.0＝5.6kb（質(zhì)粒切割后形成的大的片段＋切割目的基因時形成的大片段）；如果目的基因反過來插入，則進行電泳后觀察可出現(xiàn)長度為0.1＋3.0＝3.1kb（質(zhì)粒切割后形成的小的片段＋切割目的基因時形成的大片段）和2.7－0.1＋1.0＝3.6kb（質(zhì)粒切割后形成的大的片段+切割目的基因時形成的小片段）。